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冰冻保存Rh阴性稀有血液方法的建立 摘自 临床和实验医学杂志 2007年第5期 tit |
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alitycontrolindicesmeetthenationalrequirment蚰well.【Keywords]sRhnegativeRBCs；Frozen；Glycerolisation；Wash；R~overyrateRh阴性稀有血液的供应一壹是输血界的难题。为了保证临床急诊Rh阴性患者输血的需要，建立Bh阴性血液深低温冰冻长期保存是唯一有效的方法…。本站从2005年10月至今开展了Rh阴性稀有血液的深低温冰冻保存，并制备了冰冻红细胞22袋。笔者对22袋冰冻红细胞的制备、融化及洗涤去甘油的工艺方法进行了改进，提高了红细胞的回收率，其他相关质控指标也获得了较满意的效果。现将结果报告如下。1材料与方法1.1仪器与材料一舳℃血库专用低温冰箱（日本SANYO公司生产）；D一37520型大容量离心机（德国Heraeus公司生产）；ACS一152型热合机（13本泰尔茂公司生产）；电子恒温三用水浴箱（汕头市医用设备厂）；BC一3000plus全自动血细胞分析仪（深圳迈瑞医疗仪器公司）；723型分光光度计（上海医疗仪器仪器厂）；一次性无菌空袋、连接管（华南塑料制品厂）；57.1％复方甘油保存液、9％NaCI溶液、三珠冷冻袋（北京博德桑特输采血器材公司）。0.9％NaCI注射液（四川科伦药业股份有限公司）。12冰冻红细胞的制备方法参照高浓度甘油方法”’进行了改进。①将采集2―6d内的Rh阴性全血（血液保存液为CPD配方）22袋（1U／袋），经（3500rpm.10min）离心分离出血浆、血小板及部分白膜层。将红细胞移至三珠冷冻袋，采用电子摇摆秤和输血器自动控制法，向剩余的红细胞内准确、均匀的加入57.1％复方甘油保存液160ml，速度控制应先慢后快，并采用电子摇摆秤不断振荡混匀，于5～10rain加毕（一般8min为宜），使最终浓度为40％（注意：加完甘油后，需排尽血袋内的空气）。在室温基金项目：奉课题是2005年深圳市宝安区科技局赉助项目.No2005183平衡30min后，离心去除上清多余的甘油化试剂，放入一80℃冰箱保存。②将一80。c冰箱保存的血液取出，置37~C～42℃水浴中快速解冻（一般3min内融化），注意水浴箱中的水一定要浸没血袋，不断摇动.使血袋与水充分接触，加速其融化，但不能用力去挤压血袋，减少红细胞在溶化过程中的机械损伤。融化后的血袋要在室温静止10min，让红细胞得到充分休息，增强红细胞的抗破坏能力。③向融化后的冰冻红细胞中加人40ml9％NaGl（15ml／min），同时振荡摇匀，平衡5min。再加入0.9％NaCI250ml，混匀.再平衡5min。离心去上清，再用0.9％NaCI400～500ml，洗涤1次，去甘油。加入100ml09％NaCI溶液悬浮红细胞，供质量检测使用。I.3冰冻红细胞的质量检测I.3.1甘油残余量采用甘油磷酸氧化酶法测定”’。1.3.2上清液游离血红蛋自【Hb）含采用氰化高铁法测定（BC一3000plus全自动血细胞分析仪检测）。I.3.3体外溶血试验体外溶血率=（37℃水浴后上清Hb含量一37"C水浴前上清Fib含量）／37℃水浴前上清Hb含量×1（30％。1.3.4红细胞回收率红细胞回收率=成品Hb含量／（总上清Hb含量+成品Hb含量）×100％。2结果22袋冰冻甘油红细胞冰冻保存时间为60～90d，解冻融化洗涤后的红细胞形态，在显微镜下观察细胞膜完整，表面呈双凹状，无团聚现象，经过2次洗涤后红细胞回收率为（87.52±2.31）％，优级于国家质量标准（／>80％）。其他相关的质控指标均
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