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细胞在恶性血液系统疾病中的应用研究 |
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以有不同的来源，包括白血病患者的骨髓或外周血单个核细胞、健康供者的外周血单个核细胞和脐血单个核细胞。l4!2h,百拇医药
1.1来源于白血病患者的单个核细胞l4!2h,百拇医药
Christine等[2]从13名慢性髓细胞性白血病（CML）患者的外周血单个核细胞中成功扩增出CD3+CD56+的CIK细胞群，培养第21～28天CD3+CD56+细胞平均扩增25倍（2.2～525倍），全部患者的外周血单个核细胞在培养开始时细胞遗传学检测均为Ph（+），培养至第21～28天，12名患者Ph（-）。他们的研究显示CML患者CIK扩增倍数低于正常供者，但与淋巴瘤患者CIK扩增倍数相近，CIK扩增的倍数与患者的异质性有关而与培养条件无关，而且与培养起始时CD3+或CD3+CD56+数无关，也与以往的治疗无相关性，从高白细胞的患者或原始细胞比例增高的患者中均可培养出Ph（-）的CIK细胞。值得注意的是2例来自患者冻存外周血的细胞扩增不理想。l4!2h,百拇医药
1.2来源于正常供者的单个核细胞l4!2h,百拇医药
Schmidt-Wolf等[3]从正常供者的外周血单个核细胞培养CIK细胞，培养14d时CIK细胞的T细胞受体α.β阳性，CD3+CD56+的CIK细胞为28.5%，培养前后CIK细胞扩增1071倍。Schmidt-Wolf等的研究显示CIK细胞比LAK细胞的扩增更快，且具有较LAK细胞更强的对肿瘤细胞株的溶细胞活性，CIK介导的细胞溶解作用是非MHC限制性的。l4!2h,百拇医药
1.3来源于脐血的单个核细胞l4!2h,百拇医药
黄倩等[4]用脐血单个核细胞第1天加入γ干扰素（IFN.γ），第2天加入白细胞介素.2（IL.2）、CD3单抗，培养4d后获得脐血CIK细胞。脐血CIK细胞对K562细胞的杀伤活性强于CD3AK，两组的杀伤率分别为76.85%、71.18%;且脐血CIK细胞的培养上清对K562细胞的杀伤活性也优于CD3AK，两组的杀伤率分别为35.92%、29.05%。短期培养的脐血CIK细胞的增殖活性低于CD3AK，但加入粒细胞集落刺激因子（G.CSF）可显著提高CIK细胞的增殖数量。
2CIK细胞的制备方法gl@,百拇医药
目前诱导CIK细胞的方法有多种，主要区别在于细胞因子的组合不同。CD3单抗和IFN.γ是必要的组分，CD3单抗起到丝裂原活性的作用，可以与T细胞表面的CD3交联，诱导细胞活化，而IFN.γ可以诱导IL.1等细胞因子的合成。其他的细胞因子尚有IL.1、IL.2、IL.7、IL.12等。国内王文红等[5]比较了3种方法诱导的CIK细胞在细胞表型、增殖活性和细胞毒性3个方面的异同。用RPMI1640调整外周血单个核细胞至2×106?ml-1，第1天每组均加入重组人IFN.γ至终浓度为1000U?ml-1，置37℃、体积分数为5%CO2细胞培养箱中培养，24h后加CD3单抗25μg?L-1，各组再分别加入重组人白细胞介素:第1组IL.1100U?ml-1，IL.2300U?ml-1;第2组IL.2300U?ml-1;第3组IL.12100U?ml-1。各组加入以上细胞因子后继续培养，每3～4d换新鲜培养液，调整细胞数为2×106ml-1，同时分别补加3种白细胞介素。于第14天收集细胞检测。3组CIK细胞的生物学性状以流式细胞仪检测其CD3、CD4、CD8、CD16、CD56的表达，IL.1和IL.2联合组CD4细胞的百分率高于其他两组，IL.12组CD3细胞的百分率低于其他两组。CIK细胞的增殖能力方面，IL.12组的略低于其他两组，另外两组间无差异。用LDH释放法测定CIK细胞的细胞毒性，结果显示3组CIK细胞在杀伤活性上不存在明显差异。结果表明，CIK培养时加入IL.1不能增加细胞的增殖能力，CIK细胞的诱导方法可以简化，目前多数实验室均采用IFN.γ、CD3单抗和IL.2联合应用制备CIK细胞[2]。gl@,百拇医药
CIK细胞应用于临床一方面要保证足够的数量，另一方面要保证CIK细胞较强的生物学活性和减少感染的机会。北京大学石永进等[6]在CIK细胞的培养中采用1000ml的大容量培养袋，用一次性注射器进行细胞的定量加样、取样，换液时将培养袋在大容量离心机中离心1000r?min-110min，再用分离夹挤出上清，新配好的培养液经输液管插入培养袋进液管后输入培养袋，密封后放入37℃恒温箱培养。这种培养方法操作更简单，污染机率大大降低，使回输更安全。gl@,百拇医药上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页
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