> ● 亲和标记(affinity labeling)是常用的分离细胞表面受体的方法, 其原理是: 将细胞与超量标记的激素(配体)混合,以饱和所有特异受体的激素结合位点。洗去多余的激素,然后加入能够与受体和配体结合的共价交联剂将激素与受体进行共价交联(图5-15)。
图5-15 亲和标记胰岛素受体
大多数交联剂(cross-linking agent)含有两个可与蛋白质中自由氨基相互作用的基团(图5-16), 当表面受体与配体结合后,配体和受体上各自的自由氨基的距离靠近到足以被小分子的交联剂结合时,受体和配体就会被交联在一起。又由于与交联剂共价结合的配体和受体能够耐受去垢剂和变性剂的处理,也就是说,在有去垢剂和变性剂存在时,它们依然交联在一起,因而可用去垢剂和变性剂溶解细胞质膜,分离膜蛋白通过电泳进行分析。
图5-16 交联剂的分子结构及与受体和配体的共价交联
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