可用蜡烛缸)孵育48小时。24小时后已可见某些菌落;大多数在48小时出现。若当时无足够的实验设施,可将标本接种到可输送的培养基上运送到实验室,在48小时内,最好在24小时内,作次代培养。 以基因探针为基础的能可靠而快速检测淋球菌RNA的诊断试验可结合检测衣原体的试验,以过筛淋球菌和衣原体所致的尿道炎或子宫颈炎。在此同时以及3个月后应作梅毒血清学试验(STS),并且还应彻底检查病人以排除其他性疾病。
3.并发症:淋菌性盆腔炎,包括急性输卵管炎、子宫内膜炎、继发性输卵管卵巢脓肿及破裂后所致的盆腔脓肿、腹膜炎等。由于失治、误治,女性淋病患者,极容易由泌尿生殖器的感染进一步发展为盆腔及附件的感染,引起严重的后果,如不孕,腹痛,甚至于危及生命。
医技检查
淋球菌实验室检查包括涂片,培养检查淋球菌、抗原检测,药敏试验及PPNG测定,基因诊断。
1.涂片检查:取患者尿道分泌物或宫颈分泌物,作革兰染色,在多形核白细胞内找到革兰阴性。
双球菌涂片,女性宫颈分泌物中杂菌多,敏感性和特异性较差,阳性率仅为50%~60%,且有假阳性,因此世界卫生组织推荐用培养法检查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌较少,阳性率低,因此要取前列腺按摩液,以提高检出率。
咽部涂片发现革兰阴性双球菌不能诊断淋病,因为其他奈瑟菌属在咽部是正常的菌群。另外对症状不典型的涂片阳性应作进一步检查。
2.培养检查:淋球菌培养是诊断的重要佐证,对症状很轻或无症状病人都是较敏感的方法,只要培养阳性就可确诊,在基因诊断问世以前,培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。目前国外推荐选择培养基有改良的Thayer-Martin(TM)培养基和New York City(NYC)培养基。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基,均含有抗生素,可选择地抑制许多其他细菌生长。在36℃,70%湿度,含5%~10% CO2(烛缸)环境中培养,24~48小时观察结果。培养后还需进行菌落形态,革兰染色,氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。
3.抗原检测
⑴固相酶免疫试验(EIA):可用来检测临床标本中的淋球菌抗原,在流行率很高的地区而又不能作培养或标本需长时间远送时使用,可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。
⑵直接免疫荧光试验:通过检测淋球菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。但目前在男女二性标本的敏感不高,特异性差,加之实验人员的判断水平,故该实验尚不能推荐用来诊断淋球菌感染。
4.基因诊断
⑴淋球菌的基因探针诊断:淋球菌的基因探针诊断,所用的探针有:质粒DNA探针,染色体基因探针和rRNA基因探针。
⑵染色体探针诊断:染色体探针包括已知功能的基因探针,如菌毛DNA探针和paI基因探针,这些基因在淋球菌感染人细胞的过程中起着重要作用;未知功能的基因探针,这些探针序列与染色体的特定序列互补,但目前还不知这些基因序列的功能。以上两种染色体探针由于在淋球菌中互补序列的拷贝数较低,检测灵敏度较低,因此一般用的不多,除非有特殊的研究目的。
⑶rRNA基因探针诊断:rRNA基因探针是将与rRNA互补的DNA作为探针,该探针的靶序列是rRNA序列。
5.淋球菌的基因扩增检测:上面讲述的探针技术检测淋球菌的方法,虽然比培养方法在灵敏度,特异性和方便性上有了很大的提高,但其仍有一定的局限性,如多数情况下需要标本的淋球菌浓度很高,PCR技术和连接酶链反应的出现进一步提高了检测淋球菌的灵敏性,它具有快速、灵敏、特异、简便的优点,可以直接检测临床标本中极微量的病原体。
6.临床基因诊断淋球菌的注意事项:目前临床检测淋球菌的基因诊断方法主要采用PCR方法,但是该方法在临床检测中应注意几个问题。
⑴引物设计:除了以上所列的淋球菌PCR引物外,还可从在其他基因上设计,但是引物序列应具有特异性。因为细菌的染色体较大,许多基因序列并没有搞清楚;同时细菌之间或近或远有一定的同源性,而且细菌所含质粒序列间也存在同源性,因此设计引物一定要进行基因数据库比较分析,同时进行特异性和灵敏性实验,从中选择引物进行临床检测。
⑵临床标本处理:对临床标本来讲,PCR模板要求越纯越好。这就要求在采集标本时要取到准确的位置,对于无症状患者要适当多采样,以保证采集到病原体细菌。另外由于临床标本成分比较复杂,有时简单处理的标本PCR扩增效果并不理想,这可能是由于杂质过多造成的,需要进一步纯化,如用
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