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快速薄层扫描法测定三七中总皂甙含量 |
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皂甙C1的Rf值一致。在可见光波长范围内对三七皂甙C1与三七总皂甙斑点进行光谱扫描，结果二者扫描光谱基本相同，均在530 nm附近有最大吸收。结果见图1。
图1 三七皂甙C1与三七总皂甙斑点进行光谱扫描图
a. 三七皂甙C1 b.三七总皂甙
双波和反射法锯齿扫描，SX=3，狭缝1.2 mm，X 0.4 mm，λS=530 nm，λR=650 nm，灵敏中等，背影校正。薄层层析及薄层扫描见图2。
图2 三七中总皂甙的薄层层析及扫描图
1.三七皂甙C1标准品 2.三七样品
2.3 标准曲线的绘制：用定量毛细管分别吸取上述标准品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μl点于同一硅胶G薄层板上，按薄层扫描条件项下条件层析，扫描，以三七皂甙C1点样量(μg)为横坐标，以斑点峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程为Y=13 130.7 X－4381.7，相关系数γ=0.9 996，相关系数检验P＜0.001。结果表明，三七皂甙C1在0.70～3.50 μg范围内点样量与扫描面积积分值呈一不通过原点的直线，故用外标二点法测定。
2.4 稳定性试验：在同一硅胶G薄层板上，点标准品溶液2 μl，展开，显色后，分别于30、60、90、120、150 min进行扫描，结果2.5 h内斑点面积积分值基本不变=13589.604，RSD=2.871%。
2.5 精密度及重现性试验：用定量毛细管吸取标准品溶液2 μl，点相同浓度的5个点于同一薄层板上，展开，显色，扫描测定，结果斑点面积积分平均值=13 654.585，RSD=1.586%。
同一展开后的样品斑点连续5次扫描测定结果斑点面积积分值平均值=13 710.431，RSD=1.874%。
2.6 样品含量测定：分别吸取样品溶液各6 μl，点样于硅胶G薄层板上，随行点标准品溶液2 μl和4 μl，展开，显色，外标二点法直接扫描测定出样品斑点的浓度值，计算三七总皂甙的含量，结果见表1。
表1 不同规格三七中总皂甙的含量 (n=3) (%)
测定项 样 品
20头 40头 60头 80头 120头 160头 无数头 制三七20头
总皂甙 6.78 6.64 6.51 5.95 5.51 5.35 5.01 2.85
含 量
RSD 1.927 0.314 1.481 6.225 2.359 1.591 2.438 2.391
2.7 加样回收率试验：精密吸取已测定三七总皂甙含量的三七样品(80头)溶液5 ml，加入标准品溶液1 ml，按样品测定项下条件测定，结果平均回收率为98.93%，RSD=2.587%(n=4)。
3 讨论
3.1 三七总皂甙中，以三七皂甙C1含量最高，约占总皂甙的一半［5］；又三七皂甙均为20(s)－原人参三醇或20(s)－原人参二醇皂甙，不含齐墩果酸［2］，其显色后的颜色基本相同，故本文选用三七皂甙C1为标准品测定三七总皂甙的含量。
3.2 本文三七用甲醇提取后，直接点样，层析测定，避免了用酸碱水解法［6］引起皂甙元部分破坏［7］造成的误差及其操作的繁琐。
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