|
高速逆流色谱制备性分离纯化白果内酯和橙皮甙对照品 |
| |
10μL；取对照品银杏内酯A(甲)、B(乙)、C(丙)和白果内酯(丁)以甲醇溶解制成对照液每mL含1mg，点样2μL。由甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(4：6：2.7：0.8)为展开剂，上行展距10cm，晾干，醋酐熏20min，160℃烘30min,UV365nm下银杏总内酯呈亮黄色荧光斑点与对照品相应斑点的Rf值分别为(甲)0.28，(乙)0.46，(丙)0.54和(丁)0.65相一致。
1.2 HSCCC分离纯化
1.2.1 仪器：89-A型HSCCC(北京市新技术应用研究所)，进样阀2mL。
1.2.2 白果内酯的分离纯化HSCCC溶剂系统由氯仿-甲醇-水(4：3：2)组成，充分混合后分取下相溶剂为流动相，上相溶剂为固定相，保留值79%。取银杏内酯以流动相溶剂溶解配制样品液每mL含银杏粗提物1g，按常规上机条件［5］，主机正转800rpm,进样2mL，流动相由首端向尾端洗脱，流速2mL/min，从进样品后50min开始定时收集溜份，TLC鉴测，收集合并白果内酯溜份。连续进样3次，得量10mg。
1.3 白果内酯纯品鉴定
1.3.1 HPLC测定 由上海市中药研究所代测，得HPLC/RI谱见图1。结果显示Rt3.5min前为溶剂峰，Rt5.4min呈现对称单峰为白果内酯。
图1 白果内酯(纯品)的HPLC/RI谱
Rt3.5min前为溶剂峰，
Rt5.4min白果内酯峰
1.3.2 MS(EI)测定 采用J.MS-300型质谱仪测定分子离子峰和主要碎片(m/z)：327(M++1)，326(M+)，270(M-56)，196(M-129)，178(M-12-H2O)，129(C4H+9CO2+CO)，121，57(B+，C4H9)，44(CO2)，41与文献［6,7］一致。
1.3.3 IR的测定 采用FT-IR5DX红外光谱仪(美国Nicolet公司)测定IRKBrcm-1：3450(羟基)，1800，1780，1760(r-内酯)与文献［6］一致。
1.3.4 与国家标准样品比较 本法所得白果内酯上述HPLC/RI，IR，MS与上海中药研究所提供的白果内酯标准图谱一致。
2 橙皮甙分离鉴定
2.1 样品制备及TLC鉴定
2.1.1 样品制备 取陈皮粗粉100g，以95%乙醇回流提取4次得提取液1500mL，室温放置过夜，上清液减压浓缩至200mL，冰箱放置过夜，分取清液，加水50mL稀释，加入乙醚萃取，析出沉淀，水洗，抽滤，干燥，得粗品4g。
2.1.2 TLC鉴定 按中国药典95版一部159页陈皮TLC鉴别项，样品以含橙皮甙为主。
2.2 HSCCC分离纯化
2.2.1 仪器同上，检测器为57WAUVSD(上海光学仪器厂)，进样阀2mL。
2.2.2 HSCCC分离纯化 由氯仿-甲醇-水(4∶3∶2)配制成溶剂系统。取上相溶剂加入适量氨水溶解样品，配制每mL含5.2mg样品的溶液。操作同上。以下相溶剂为固定相，主机反转800rpm，进样2mL，流动相由尾端向首端洗脱，流速2.0mL/min。UV286nm检测，1h内完成分离得3个波峰，峰2经TLC检测为单一班点与纯品橙皮甙一致。连续进样3次共得橙皮甙20mg。HSCCC/UV谱见图2。
图2 陈皮粗提物HSCCC/UV谱
2.3 橙皮甙纯品HPLC鉴定
2.3.1 仪器型号：岛津6A高效液相色谱仪，SPD型UV检测器，CR-3A数据数理机。C18柱150mm×6.0mm。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 商品西洋参DNA指纹图谱鉴别
下一个医学论文： 谨慎开发中草药注射剂
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 中医论文 >> 正文