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高效液相色谱法测定法莫替丁的血药浓度 |
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的贮备液，再用甲醇分别稀释成0.625、1.25、2.5、5.0、10.0、15.0μg/ml的工作液，冰箱保存。
2.2 测定波长的确定：取法莫替丁贮备液适量，用流动相稀释至1 μg/ml，用UV－2100型分光光度计扫描，发现其λmax=266.1nm，因此，确定检测波长为266nm。
2.3 色谱条件：Nova_Pak C18（3.9×150mm，5μm），柱温35℃；流动相：0.2mol/L醋酸铵（pH4.5）∶乙腈（94∶6）；流速1.1ml/min；检测波长266nm，0.001AUFS。
2.4 样品预处理：精密量取血浆样品0.5ml，置100ml试管中，加入7.5％盐酸羟胺50μl，漩涡振荡0.5min，加入0.5ml饱和碳酸钾溶液，漩涡振荡0.5min，再加入6ml乙酸乙酯，振荡10min，离心10min（3 000r/min），吸取上层乙酸乙酯5.5ml于尖底试管中，60℃氮气吹干，残渣用100μl流动相溶解，离心，取20μl进样分析，结果见图1。
图1 空白血浆（A）和法莫替丁血浆样品
（B：法莫替丁tR=7.82min）色谱图
2.5 色谱峰的定性鉴别：用996型二极管阵列检测器，对样品峰进行光谱鉴别。结果表明，样品峰为纯峰，而且其λmax=266.1nm，与标准品的紫外光谱一致。
2.6 标准曲线制备：分别于6支10ml试管中加入不同浓度的工作液10μl， 再精密加入0.5ml空白血浆，使每管含法莫替丁分别为12.5、25、50、100、200、300ng/ml，振摇0.5min，然后按2.4项下自“加入7.5％盐酸羟胺起……”处理测定。以法莫替丁峰面积（X）对其浓度（Y）进行线性回归，得回归方程：Y=0.01 266X＋2.66，γ=0.9 996。结果表明，在12.5～300ng/ml范围内，法莫替丁的血药浓度和峰面积呈良好线性关系。
2.7 回收率试验：分别于9支试管中加入高、中、低3个浓度（每个浓度3份）的工作液10μl，再各加入0.5ml空白血浆，按2.4项处理测定，用标准曲线求得血药浓度除以实际浓度，求得方法回收率，结果见表1。
表1 法莫替丁的方法回收率（n=9）
实际浓度(ng/ml) 测定浓度(ng/ml) 方法回收率(%) RSD(%)
12.5 13.49 107.29 2.64
50 50.08 100.16 4.47
200 198.16 99.08 2.28
2.8 精密度试验：对高、中、低3种浓度（每个浓度测定5次）分别进行日内及日间精密度考查，结果见表2。
表2 法莫替丁的日内及日间精密度（n=5）
血药浓度(ng/ml) 日内RSD(%) 日间RSD(%)
12.5 5.00 6.59
50 4.63 3.82
200 1.93 2.78
2.9 检出限：以3倍于基线噪音的药量为最低检出量，该方法为0.6ng。血浆中的最低检测浓度为8ng/ml。
3 健康人血药浓度测定
健康志愿者10人，年龄20a～21a，体重50kg～65kg。单剂量口服法莫替丁市售片I（20mg/片）和试制片Ⅱ（20mg/片）各40mg，交叉服药的间隔时间为1wk。不同时间取血测定血药浓度，结果见表3。
表3 健康人口服法莫替丁的血药浓度（±s，n=10）
采血时间(h) Ⅰ(ng/ml) Ⅱ(ng/ml)
0.5 18.92±5.62 20.67±7.52
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