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正交试验优选葛根提取工艺 |
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2.2.1 对照品溶液配制：精密称取葛根素对照品5 mg于5 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2.2 供试品溶液制备：取正交试验顺序表中各所得稠膏，按重量比精称相当于1 g葛根药材的稠膏，以甲醇溶解，定量转移至5 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2.3 薄层层析及扫描条件：用定量毛细管分别吸取对照品溶液及供试品溶液各2 μl点于同一块硅胶G-CMC-Na薄层板上。以氯仿-甲醇-水(16∶5∶2)下层液展开，挥干溶剂后，紫外灯(254 nm)下检视，被检测组分葛根素显一蓝色荧光斑点，分离度好，结果见图1。经CS-9301薄层扫描仪测定，λS=255 nm，λR=370 nm，SX=3，狭缝0.4 mm×0.4 mm，双波长反射式锯齿扫描。
2.2.4 线性关系的考察：分别吸取对照品溶液1，2，3，4，5 μl点于同一硅胶G板上，依法展开，测定。以点样量为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标作图，得一未通过原点的直线，回归方程为Y=1 330.6 X+145.72，γ=0.999 6。表明葛根素在1～5 μg范围内线性关系良好。
2.2.5 稳定性试验：将供试品溶液点于薄层板上，展开，测定，再扫描1次/30 min。结果表明其斑点峰面积积分值在2 h内基本不变。
2.2.6 精密度试验：同一薄层板上5个相同量对照品斑点展开，测定斑点峰面积积分值，计算RSD=0.16%；5块不同薄层板上点相同量供试品液斑点，计算RSD=1.29%。表明精密度良好。
2.2.7 回收率试验：在已知葛根素含量的样品中，定量加入葛根素对照品5 mg，测定回收率(n=4)，得平均回收率为98.7%，RSD为1.83%。
2.2.8 样品的含量测定：吸取各供试品液2 μl，葛根素对照品溶液各1 μl，4 μl，依法展开，以外标二点法测定。测定结果见表2，方差分析结果见表3。
表2 葛根素L9(34)正交试验数据及计算表
试验号 因素 葛根素含量
(%) 合计
(%)
A B C D
1 1 1 1 1 2.50 2.60 2.47 7.57
2 1 2 2 2 2.14 2.07 2.16 6.37
3 1 3 3 3 1.60 1.54 1.65 4.79
4 2 1 2 3 2.13 2.15 2.02 6.30
5 2 2 3 1 2.30 2.27 2.21 6.78
6 2 3 1 2 2.19 2.18 2.12 6.49
7 3 1 3 2 2.26 2.31 2.20 6.77
8 3 2 1 3 1.67 1.59 1.69 4.95
9 3 3 2 1 2.31 2.32 2.27 6.90
K1 18.73 20.64 19.01 21.25 G=56.92
K2 19.57 18.10 19.57 19.63 G2=3 239.89
K3 18.62 18.18 18.34 16.04 CT=G2/27=120.00
K12 350.81 426.01 361.38 451.56 T=∑27X2=122.23
K22 382.98 327.61 382.98 385.34 W=(1)/(n)∑X (2)/(合)=12.18
K32 346.70 330.51 336.36 257.28
Q 120.05 120.46 120.08 121.58 ST=∑27X2-CT=2.23
S 0.05 0.46 0.08 1.58
Se=T-W=0.05 dfe=18
2.3 试验结果评价：由表3可知，A，B，C，D四因素都有高度统计意义，其最佳工艺为A2B1C2D1，即：70%乙醇提取，每次7倍量，加热提取3次，1 h/次。此工艺因不在设计的正交表中，故需要进行试验验证。
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