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党参对鼠J 774巨噬细胞吞噬活性的增强效应 |
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lection CO. (Rockville, MD, USA)提供。
1.3 细胞培养及分析：J 774细胞在Dulbecco s改良Eagle s培养液(Dulbecco s培养液加10%牛犊血清，青霉素50 u/ml，链霉素250 μg/ml)中，在37℃，5% CO2湿润条件下，温育3～4 d，经锥蓝鉴定，活细胞＞90%者，可用于实验。
细胞悬液加Hanks平衡盐溶液(HASS)配制成2×105/ml的细胞悬液。用96穴平底培养板作微量培养，每穴滴细胞悬液100 μl及不同稀释度(10 μg/ml～3 000 μg/ml)党参药液10 μl，同一浓度滴3穴为1组，留1组不加药液作对照组(O)，每穴再滴加经HASS稀释成浓度为10 mg/ml的酵母多糖A 10 μl作激发剂，及以二甲基亚酰胺(DMF)配制成浓度为10 mmol/L的双醋酸二氯荧光素(DCFA-DA) 10 μl作荧光染色，每穴终体积为130 μl。培养板置震动器上震动1 min使悬液混合均匀，然后放到5% CO2 37℃温箱内温育1 h后，直接经自动微量荧光分析仪(microplate fluorometer model 7610, Cambridge Technology Inc. Waternan MA. USA)在激发光波长(485±10) nm和辐射光(530±12.5) nm下测定其荧光强度，以相对荧光单位(RFU)表示之。获得数据直接转入相连电子计算机作统计学分析并制图。
1.4 统计学分析及制图：统计程序用Stafgraphics软件Version 5 (STSC, Rockville, MD, USA)，取每组3穴RFU之平均值(±s)作单向分析，经Tukey s试验，求出显著性差异值，可信度(P＜0.05)。制图用Sigmaplod软件Version 4.1 (Jandel Scientific Corte Madera CA, USA)。
2 结果
显示党参水提液能增强J 774巨噬细胞的免疫活性，在浓度500 μg/ml时出现显著性增强效应(P＜0.05)。随浓度增加，其效应也相应增强。2 000 μg/ml时达峰值，与无药对照组比较，细胞的吞噬活性增强1.70倍，3 000 μg/ml时效果有所降低，详见表1及图1。
图1 党参对J 774巨噬细胞吞噬活性的增强作用
图中○代表相对荧光单位(±s)，*示与无药对照组比较有显著性差异(P＜0.05)
3 讨论
我们选用巨噬细胞来鉴定党参的生物学活性是由于它是一种主要的免疫活性细胞，在机体免疫反应的各个环节，都起到关键的调节作用［2］。在自然免疫中，巨噬细胞和其它吞噬细胞(中性白细胞和单核细胞)吞食并清除入侵异物，保护机体免受损害；在获得性免疫反应，巨噬细胞首先辨认、吞噬和加工抗原性异物，增强其免疫原性，然后分别传递给相应的淋巴细胞，诱发体液免疫或细胞介导免疫。此外，巨噬细胞还能协助或激活细胞毒淋巴细胞和NK细胞，溶解破坏突变肿瘤细胞，起免疫监护作用。除上述细胞-细胞相互作用外，巨噬细胞本身还能合成，分泌50多种不同的细胞因子，参与机体免疫反应全过程［3］。基于上述机理，我们确信党参既能增强巨噬细胞的免疫活性，也必然能增强整个机体的免疫反应。
J 774巨噬细胞株来源于BALB/C小白鼠的网织肉瘤细胞，具有正常巨噬细胞的多种功能，最大优点是性能稳定，易于培养增殖，已被用于检测多种中草药的生物学活性。
吞噬细胞在吞噬异物时，耗氧量突然增加，称呼吸性氧爆炸(Respiratory Oxidative Burst)［3］，伴随有光辐射，可借化学荧光法(Chemiluminescence)作定量分析，其相对荧光强度反应该巨噬细胞的活性强度。
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