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薄层色谱扫描法测定海康胶囊中海参多糖含量 |
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李海棠 周清凯 蔡云见 张穗芳
提要 采用琼脂电泳扫描法测定海康胶囊中海参多糖含量为51.4%。
关键词 海参多糖；琼脂电泳；色谱扫描法；含量测定
海参在我国民间曾用于治疗肺结核、阳痿、再生障碍性贫血、糖尿病、肝炎等疾病。我们曾报告了利用海参多糖为主要原料制成的海康胶囊制剂与灭澳灵作对照，试用于治疗慢性乙型肝炎，取得一定的疗效(周清凯，蔡云见，张玲楚，等.海参多糖提取分离及治疗乙型肝炎初步疗效观察.1994年兰州全国多糖和脂质类生化药物学术会议论文汇编，92页)。为了控制临床用药质量，我们对海参多糖的含量测定方法进行了初步的研究。现将其测定方法报道如下。
1 仪器与材料
岛津CS-930双波长薄层色谱扫描仪；琼脂糖为电泳用的生化试剂；化学试剂均为分析纯；样品供试液(海康胶囊)，海参多糖对照液(自制)。
2 方法与结果
2.1 样品供试液制备：取海康胶囊5粒，倒出内容物混匀，精密称取0.1 g内容物，用20 ml水热溶30 min，过滤不溶物，重复用20 ml水热溶30 min，过滤，合并滤液，用水定容50 ml(2 mg/ml)作为样品供试液。
2.2 海参多糖对照液制备：精密称取海参多糖对照品(HA-P)(自制，见下)，用水加热溶解，过滤，配制成1 mg/ml作为海参多糖对照液。
2.3 电泳操作法：照电泳法试验(《中国药典》1995年版2部附录28页)，以琼脂糖为支持介质〔取琼脂糖0.6 g用己二胺缓冲液(0.05 M， pH8.5)100 ml置水浴中加热使熔化，混匀，取15 ml琼脂糖缓冲液涂布于7 cm×9 cm玻璃上，静置，凝结成无气泡的均匀涂层〕，样品供试液和海参多糖对照液以挖孔法加样，将加样后的琼脂糖板置电泳槽架上，经纱布桥浸入己二胺缓冲液中(0.05 M， pH8.5)，接通电源，在10～12 V/cm电位梯度下电泳2 h，用0.1% CTAB水液固定30 min，取出琼脂板于40℃干燥，将干燥后的琼脂板用0.1%甲苯胺蓝溶液染色30 min，再用36%醋酸－乙醇－水(0.15∶5∶5)，混合液洗脱干净甲苯胺蓝染色剂，干燥，得显色琼脂板，供扫描或保存。
2.4 扫描条件：按拟定方法进行电泳，用CS-930薄层扫描仪对海参多糖对照液和样品供试液的斑点在可见区(370～700 nm)作光谱测定，二者均在560 nm有一个最大吸收峰，故检测波长确定为560 nm。单波透射法直线扫描，线性化系数 SX=5，狭缝1.20 mm×1.20 mm。
2.5 线性关系考察：用定量毛细管吸取海参多糖对照液(1 mg/ml)0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 μl，分别加入琼脂板的孔内，按上述电泳操作法得已显色的琼脂板，按拟定的扫描条件测定各斑点的面积积分值，如下表1。
表1 海参多糖对照品线性关系考察
HA-P ( X) 0.5 μg 1.0 μg 1.5 μg 2.0 μg 2.5 μg 3.0 μg 3.5 μg
吸收面积 ( Y) 缺 1746 2532 3361 4036 4931 5945
以点样量为横坐标，斑点吸收面积为纵坐标，绘图，得一直线。回归方程为：Y=47.02+1649.54 X， γ=0.9982。
2.6 样品含量测定：用定量毛细管吸取样品供试液(2 mg/ml) 2 μl (4 μg)，海参多糖对照液(1 mg/ml) 1 μl和3 μl，分别注入琼脂板的孔内，按上述电泳操作法得已显色的琼脂板，按似定的扫描条件测定各斑点的面积积分，计算含量，如下表2。
表2 样品中海参多糖含量 (%)
批号 海参多糖 平均值
950502 46.5
950628 55.0 51.4
950507 52.7
3 结果与讨论
3.1 有关多糖含量测定方法报道很多，基本上都是以多糖中的某种单糖成分作为含量控制指标，如香菇多糖、猪苓多糖是测定葡萄糖的含量作为质量控制标准［1］，硫酸软骨素是测定氨基葡萄糖的含量作为质控标准［2］。海参多糖曾见有测定葡萄糖醛酸含量作为质量控制[1] [2] 下一页
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