化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾组织CTGF mRNA表达的影响

　　糖尿病肾病(diabetic Nephropathy, DN)泛指由于糖尿病导致的肾小球病变，因其明显的变化是细胞外基质(extracellular matrix, ECM)增生，所以又称糖尿病肾小球硬化症，是导致慢性肾衰竭(chronic renal failure, CRF) 的主要原因之一。结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)是近年来研究发现的一种新的生长因子，其相关研究已经成为目前防治脏器纤维化的热点。它对肾细胞的分泌、增生及ECM的合成和降解具有重要的调控作用，其异常表达在肾纤维化进程中起着关键作用［1］。化瘀通络中药—肾络通是我们临床上治疗慢性肾脏疾病的基础方［2］。本实验应用链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)制备大鼠糖尿病模型，采用RT-PCR检测化瘀通络中药对其肾组织CTGF mRNA表达的影响，从分子水平探讨化瘀通络中药的可能作用机制，为中药治疗DN提供新的思路。

　　1  材料与方法

　　1.1  动物 

　　清洁级健康雄性Sprague-Dauley系大鼠40只，体质量(180±10)g，由河北医科大学动物实验中心提供，动物合格证号：冀医动管字07259号。

　　1.2  化瘀通络中药 

　　肾络通，由地龙、乌梢蛇、丹参、黄芪等组成，按比例称取后，水煎、过滤，浓缩至含生药1.5 g/mL。装入瓶中密封保存于4℃冰箱中。饮片经过鉴定均为正品，由河北医科大学中医院制剂室提供，并经过鉴定均为正品。

　　1.3  造模与分组 

　　大鼠自由饮水，常规饲料适应性喂养1周后，进行尿蛋白定性检测，结果全部为阴性。随机分为正常组、模型组、对照组和中药组，每组10只。除正常组外，其他各组按60 mg/kg一次性腹腔注射STZ，自由饮水、摄食，72 h后尾静脉取血快速血糖仪测随机血糖，以≥16.7 mmol/L为糖尿病模型成模标准［3］。正常组注射相应量0.9%氯化钠注射液。造模各组在糖尿病模型建立后，按血糖水平重新分组，组别与动物数不变。

　　1.4  给药与取材 

　　成模后1周开始给药，中药组给予肾络通煎剂灌胃25 g/(kg·d)，对照组给予贝那普利水溶液10 mg/(kg·d)，对照组、中药组用药量均相当于临床人用剂量的20倍。正常组和模型组给予等量0.9%氯化钠注射液灌胃，均每日1次。

　　1.5  取材 

　　给药第16周末，各组大鼠置于代谢笼中，禁食不禁水收集大鼠24 h尿液；10%水合氯醛30 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，分离血清，然后迅速取肾组织置于液氮中，再转存于-70℃超低温冰箱中待检。

　　1.6  生化指标检测 

　　双缩脲法定量24 h尿蛋白，Beckman cx7全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等生化指标。

　　1.7  CTGF mRNA检测 

　　各组肾组织

上一页  [1] [2] [3] [4] 下一页