4), 111.0 (C-4), 124.0 (C-12), 128.5, 128.4, 128.2 (C-4a, -14a, -8a), 134.8 (C-12a), 144.7 (C-10), 147.0 (C-2), 147.5 (C-3), 150.0 (C-9)。以上波谱数据与文献报道［5］的一致，故鉴定为紫堇碱。 2.5 延胡索中紫堇碱的含量测定
2.5.1 色谱条件与系统适应性实验 照“分析HPLC色谱条件”，样品的理论塔板数均大于10 000，分离度均大于4.0。结果见图2。
2.5.2 供试品的制备 取延胡索粗粉约1 g，精密称定，至50 ml具塞三角瓶中，加入70％的乙醇30.00 ml，称重，40 ℃超声提取1 h，取出，补足减失重量，冷却，滤过，取续滤液10.00 ml，回收乙醇，流动相定容至10.00 ml，过0.45 μm滤膜，备用。
2.5.3 线性范围考察 精密称取紫堇碱对照品0.016 4 g于50 ml容量瓶中，用流动相定容，得对照品储备液。取5.00 ml对照品储备液于25 ml容量瓶中，用流动相定容，得质量浓度为65.6 μg·ml-1的对照品标准溶液。分别精密吸取对照品标准溶液2，4，8，12，16，20 μl注入色谱仪，记录峰面积。以色谱峰面积为纵坐标 (Y)，紫堇碱的进样量为横坐标 (X)，绘制标准曲线，得回归方程：Y = 942.131 6X + 0.293 7，r=0.999 997，样品在0.131 2～1.131 2 μg范围内线性关系良好。
2.5.4 精密度实验 精密吸取同一对照品标准溶液8 μl，照前述色谱条件重复进样6次，测得紫堇碱峰面积的RSD为0.25%，表明测定仪器精密度良好。
2.5.5 稳定性实验 将同一份供
试品溶液放置0，2，4，8 h后，照前述色谱条件进样20 μl，测得紫堇碱在8 h内峰面积的RSD为0.21%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。 2.5.6 重复性实验 取同一批样品，按“2.5.2”项下方法，平行制备供试品溶液6份，按前述色谱条件进样20 μl，测得延胡索中紫堇碱含量平均值为0.977 8 mg·g-1，RSD为0.41 %，表明测定方法重复性良好。
2.5.7 回收率实验 取已知含量的样品约0.5 g，共9份，精密称定，分别加入不同量的紫堇碱对照品，按“2.5.2”项下方法制备，按前述色谱条件进样20 μl，测得紫堇碱的平均回收率为97.19%，RSD为2.25%(n = 9)，表明测定方法准确可靠。结果见表1。
表1 回收率实验（略）
图1对照品的色谱图（略）
图2样品的色谱图（略）
3 讨论
延胡索生物碱类大部分属于小檗碱或原小檗碱型，它们性质相差较小，极性相近，利用常规的分离方法很难得到高纯度的单体，而高效液相色谱具有柱效高、操作简单、分离出来的化学单体纯度高的特点。我们在利用常规的分离方法制备高纯度的紫堇碱效率较低的情况下，尝试用半制备高效液相来制备紫堇碱单体，结果发现效率高，成本低，适合紫堇碱对照品的大量制备。
延胡索总生物碱在酸水或乙醇中有较好的溶解性能，对于其总生物碱的提取方法，文献报道以回流法为多［6］，但此法整个工艺耗时较长，提取率较低。另有文献报道，以氨-乙醚为溶剂，采用超声、冷浸、回流3种方法提取延胡索，结果表明超声提取方法含量高，操作简便。本实验中，紫堇碱的含量测定采用30倍量70%的乙醇40 ℃超声提取1 h，在确定的色谱条件下，分离度已达到要求。而在制备色谱中，采用乙醚进一步萃取纯化，提高了制备效率。
【参考文
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