the cells were treated for24，48and72hours res
pectively，which were not differˉent from the control group.Conclusion 10 -5 ～100×10 -5 g/L extracted liquid from qianlietongyu may show signifiˉcant antiproliferative effects on cultured prostatic stromal smooth muscle cells，without the induction of apoptosis.Key words prostate smooth muscle cells qianlietongyu apoptosis
中药前列通淤胶囊治疗前列腺疾病有一定疗效，可显著改善排尿和前列腺压痛等症状，但其作用机制尚不清楚 ［1］ 。前列腺组织包括上皮和基质（平滑肌和结缔组织）细胞成分，其中基质平滑肌细胞约占40% ［2］ 。本实验研究前列通淤提取液对体外培养前列腺基质平滑肌细胞增殖与凋亡的影响，旨在探讨前列通淤胶囊治疗前列腺疾病的细胞水平作用机制。
1 材料和方法
1.1 组织来源和实验材料 前列腺组织取自2001年我院经耻骨上前列腺摘除术新鲜标本，病理排除前列腺癌。主要试剂:PRMI-1640培养基（含L-谷酰胺），10%胎牛血清，1%胎牛血清，胶原酶Ⅰ型0.5mg/ml，青链霉素200U/ml，两性霉素1μg/ml，睾酮0.05μg/ml，氢化可的松0.05μg/ml，MTT1mg/ml，二甲亚砜（DMSO0.5%），兔抗人角蛋白单抗，兔抗人Actin单抗，TUNEL试剂盒等。中药前列通淤胶囊由珠海星光制药厂提供，胶囊内粉末用无菌生理盐水溶解后离心取上清液备用，预实
验确定前列通淤提取液有效浓度为10 -5 ～100×10 -5 g/L。
1.2 前列腺基质细胞的分离培养及鉴定 新鲜前列腺手术标本剪成2mm×2mm×2mm碎块，经消化离心后，沉淀不能溶解的组织和大块上皮细胞，再离心上清液，取沉淀细胞种入50ml培养瓶在5%CO 2 、37℃条件下培养，每周更换培养基3次，取第5代对数生长期细胞实验用。显微镜下观察细胞形态变化，取第1、5代细胞行抗α-Actin、Cytokeratin18免疫细胞化学染色，分别计算阳性细胞占总细胞数的百分比。
1.3 MTT测定细胞增殖指数 实验分7组，每组8个复孔，按细胞密度5×10 3 /cm 2 接种于96孔培养板。加入含血清培养基0.2ml，24h细胞贴壁后PBS洗2次，加入无血清培养基0.2ml，48h后细胞静止。除去上清后加入含血清培养基0.1ml，再加入10 -5 、2×10 -5 、10×10 -5 、50×10 -5 、100×10 -5 g/L5种浓度的前列通淤提取液0.1ml。作用48h后，吸除培养液，加入0.2ml MTT，37℃孵育4h，加入0.5%400μl二甲亚砜DMSO溶解形成兰色结晶色团，振动10min。在ELX800型自动酶标仪570nm波长测定每孔内DMSO溶液的吸光度（A）值。抗细胞增殖指数（%）=（对照组A值-实验组A值/对照组A值-空白组A值）×100%。
1.4 TUNEL测定凋亡指数 实验分50×10 -5 g/L前列通淤提取液和对照2组，按细胞密度5×10 3 /cm 2 接种在24孔培养板上，每组4个复孔。加入含血清培养基C1ml，24h细胞贴壁。PBS洗2次，加入无血清培养基1ml，48h细胞静止。除去上清后加入10×10 -5 g/L前列通淤提取液1ml，作用24、48和72h
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