中度液压性创伤性脑损伤模型的建立与评估

　　1.4 病理形态学观察

　　1.4.1 光镜观察4组动物每组各用4只动物分别作光镜观察。各组动物按时间要求再次麻醉后，迅速取损伤区脑组织浸入4%多聚甲醛内4℃固定48 h后，修成厚4 mm块，常规酒精脱水，石蜡包埋，行5 μm冠状切片，作HE染色，Olympus显微镜下观察、照像。

　　1.4.2 电镜观察4组动物每组各用3只动物分别作电镜观察。各组动物按时间要求再次麻醉后，迅速取损伤侧海马，投入2.5%戊二醛缓冲液中固定5～10 min，等组织稍变硬后，在显微镜下修整为1 mm×1 mm×1 mm小块，2%戊二醛/0.1 MPB(pH7.4)内，室温固定2 h，0.1 mol/lPBS清洗3次，10 min/次，1%锇酸固定30～120 min，再用0.1 mol/L的PBS清洗20 min，按50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇、100%丙酮(2次)，各5 min进行梯度脱水，丙酮与环氧树脂1∶1混合浸透2h，再以纯环氧树脂包埋剂浸透2 h，包埋，80℃恒温箱内聚合10 h，修块，半薄切片，光镜定位后，进行超薄切片，醋酸双氧铀和枸橼酸铅双重染色各10 min，透射电镜观察、拍照、记录和分析。

　　2 模型评估

　　2.1 伤后体征观察中度液压脑损伤后可致75%的大鼠反射消失、昏迷、四肢运动功能减弱，甚至去脑强直等神经功能障碍5 min左右，且可出现持续约10 s呼吸暂停。且有15%左右的死亡率。

　　假手术组有1只大鼠于开骨窗时损伤硬脑膜致出血故予以弃除;创伤3 d组2只大鼠死亡：创伤后15 min因打击后呼吸停止，抢救无效死亡1只;第3天因高颅压，脑疝死亡1只。创伤7 d组3只大鼠死亡：创伤后1 h因打击后大量鼻出血，死亡1只;第3天因高颅压，脑疝死亡1只;第5天因颅内出血死亡1只。

　　2.2 NSS评分见表1。表1 TBI对大鼠NSS评分的影响与正常组比较，aP>0.05，bP<0.01;与创伤7 d组比较：cP>0.05

　　2.3 病理形态学

　　2.3.1 光镜 ①正常组：肉眼下脑组织表面光滑，沟回整齐、清晰，无充血，肿胀及出血灶。HE染色后观察：脑组织结构正常，细胞排列有序，染色均匀，无出血、肿胀及损伤，未见炎性细胞浸润、血管扩张现象。皮层神经元细胞呈圆形或者椭圆形，核膜完整，核仁清晰可见，核仁淡染呈蓝色，周围神经纤维致密，着色均匀;②假手术组与正常组比较，无明显差别，部分切片偶可见到少许神经元肿胀，体积增大，核膜欠清;③创伤3 d组：肉眼观察，骨窗对应处的脑皮质凹陷，脑皮质表面挫裂伤，其他部位脑组织弥漫肿胀。镜下观察：蛛网膜下腔出血可延及双侧大脑半球，以伤侧为明显，偶尔可扩展到小脑表面。脑实质内有明显出血，累及额顶叶感觉运动区，并延及伤侧海马、外囊、纹状体和胼胝体，且出血灶周围血管扩张，微血管外间隙明显增大，神经胶质细胞和组织间隙水肿明显，炎性细胞浸润，部分红细胞被吞噬细胞吞噬、两侧半球有散在的损伤神经元，核呈固缩状。胞质与胞核黏附在一起，胞质强烈嗜伊红，呈严重缺血性改变。同时可见大量的中性粒细胞和单核巨噬细胞积聚在水肿带，部分浸润脑实质;④创伤7 d组：肉眼观察，骨窗对应处的脑皮质凹陷，脑皮质表面挫裂伤减轻，其他部位脑组织肿胀。镜下观察：蛛网膜下腔出血及脑实质内出血部分吸收，组织水肿减轻，伤区炎症细胞略减少，胶质细胞和纤维组织增生，可见泡沫细胞。

　　2.3.2 电镜①正常组：可见正常的内质网、线粒体、高尔基体和多聚核糖体等结构，胞体胞核形态、大小正常。可见正常形态毛细血管管腔，电镜下呈圆形或椭圆形，其内有较多红细胞，与管壁间有血浆形成的间隙，血管周围无环形水肿，可见正常海马神经元;②假手术组：可见到正常的多聚核糖体和粗面内织网和近似于正常的血管，血管周围线粒体轻度肿胀，但血管周围无环形水肿;③创伤3 d组：可见到海马神经元固缩，胞浆内大量线粒体肿胀、水肿，胞核皱缩

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