例待检者抽取空腹静脉血5ml,提取血清后于- 20 ℃冰冻保存,1 个月内集中测定G6PI 浓度。G6PI 检测操作步骤按试剂说明书,酶标仪主波长490nm ,副波长630nm 读板,以空白和G6PI 标准液吸光度值为纵坐标,浓度值为横坐标绘制标准曲线,根据各样本吸光度值从标准曲线上查出G6PI 浓度。
1.3 统计学处理:所有数据用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析,计量资料用(±s)表示,三组间血清G6PI浓度的比较用单因素方差分析,两组间关节液G6PI浓度比较用t检验,P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 三组间血清G6PI抗原浓度比较:见表1。RA患者组、其它结缔组织病组、正常对照组、三组间多个样本比较的秩和检验,有统计学意义(P<0.05),说明三组患者血清G6PI抗原不同。
表1 三组间血清G6PI抗原浓度比较(略)
2.2 两组间关节液中G6PI抗原浓度比较:见表2。RA患者组与其它结缔组织病患者组关节液中G6PI抗原浓度经独立样本t检验,有统计学意义(P<0.05),说明RA患者关节液中G6PI抗原浓度与其它结缔组织病患者关节液中G6PI抗原浓度差异有统计学意义。
表2 两组间关节液中G6PI抗原浓度比较(略)
3 讨论
RA是一种常见的以关节滑膜炎症为特征的慢性全身性自身免疫性疾病,如不及时治疗, 发病2年内即可发生不可逆的关节破坏或畸形,具有较高的致残性。因而,RA的早期诊断、早期治疗对控制该病的病情发展、阻止不可逆的关节破坏发生非常重要。但现行的诊断标准己不能满足这一要求,随着人们对RA认识的不断深入,新的方法不断的提出。
1996年Kouskoff等发现KRN转基因小鼠与NOD小鼠进行杂交产生的F1代小鼠中,所有转基因T细胞受体阳性的小鼠都发生了类似人RA的多发性关节炎[2], Matsumoto等在进一步的研究中发现其致病性蛋白为G6PI,并且在人类RA患者血清和关节液中也检测到了G6PI[3]。随后,Schaller等用免疫组化试验发现在有炎症的RA患者的关节滑膜表面内层有一种特别的细胞含有高浓度的G6PI[4]。Monica等在类风湿关节炎患者及其他炎症关节炎患者血清和关节液中发现G6PI活性酶浓度升高,但无活性的G6PI酶升高只在类风湿关节炎患者中发现。同时测量了患者血清中G6PI抗原的含量,发现RA患者血清中G6PI抗原含量远高与其他患者,并且在RA患者血清和关节液中检测到高浓度的G6PI/抗G6PI抗体免疫复合物[5]。本研究中,我们在RA患者血清和关节液中发现了高滴度的G6PI抗原,明显高于正常对照组和其它结缔组织病组。这些研究结果均提示,G6PI抗原可能参与了RA患者滑膜炎的发生和发展。
综上所述,RA患者血清和关节液中G6PI抗原提示G6PI抗原可能参与了RA患者关节炎症的发生和发展,目前仍然还不清楚G6PI抗原通过何种途径参与炎症反应,但这一抗原的发现为我们进一步认识RA提供了新的线索,血清中G6PI抗原有可能成为RA的一个新的实验室诊断指标。
【参考文献】
1] Muraki Y,Matsumoto I,Chino Y,et al.Glucose-6-phos-phate isomerase variants play a key role in the generation of anti-G6PI antibodies:possible mechanism of autoantibody production[J].Biochem Biophys Res Commun,2004,303(2):518-492.
[2] Matsumoto I, Staub A, Benoist C et al. Arthritis provoked by linked Tand B cell recognition of a glycolytic enzyme[J]. Science,1999,286: 1730-1735.
[3] Matsumoto I,Maccioni M,Lee DM,et al.How antibodies to a ubiquitous cytoplasmic enzyme may provoke joint-specific autoimmune disease[J].Nat Immunol,2002,3(4):360-365.
[4] Schaller M, Bur
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