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不动杆菌属的耐药性分析

珠海迪尔生物工程有限公司的相应测试板。

  1.3 菌种鉴定 所有菌株按常规方法分离,经革兰氏染色、氧化酶反应、触酶试验,将菌株做成0.5麦氏单位悬液,加入各对应测试板的小孔中,经35℃孵育24 h,在其对应软件上判读结果。

  1.4 碳青霉烯酶检测方法(改良Hodge法) 在MH平板上均匀涂布ATCC25923的大肠埃希菌标准株,在平板中央放置一个10 μg的美罗培南纸片,用接种环将待测菌株自纸片方向向外划线,在其相对的一边接种阴性对照菌,35℃孵育18~24 h,如果大肠埃希菌向着美罗培南纸片方向生长,则碳青霉烯酶阳性。

  1.5 超广谱β内酰胺酶检测方法 将待测菌液稀释成0.5麦氏单位,将菌液均匀涂布在MH平板上,将头孢他啶、头孢噻肟、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟/棒酸4个纸片贴在平板上,35℃孵育18~24 h,若出现头孢他啶/棒酸比头孢他啶和或头孢噻肟/棒酸比头孢噻肟的抑菌圈直径大5 mm,则该菌产超广谱β内酰胺酶阳性,即ESBLs阳性。以大肠埃希菌ATCC25922,肺炎克雷伯菌ATCC700603为标准质控菌株。

  2 结果

  74株不动杆菌属细菌中,鲍曼不动杆菌53株,醋酸钙不动杆菌6株,洛非不动杆菌11株,溶血不动杆菌4株,这些不同种的细菌的耐药性差异较大,其中,耐药性最为广泛的是鲍曼不动杆菌,它除对黏菌素、碳氢酶烯类、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和美满霉素5类药物耐药率较低外,对其他抗生素的耐药性均超过50%,有8种药物的耐药率超过90%,对复方新诺明的耐药率达到100%。另外,溶血不动杆菌虽然分离率较低,但它的耐药性仅次于鲍曼不动杆菌,对多数抗生素的耐药率较高。与之相比,醋酸钙不动杆菌的耐药率最低,其次是洛菲不动杆菌(见表1)。表1 不动杆菌属不同菌种的耐药率比较(%)

  74株不动杆菌属细菌中,有11株产生超广谱β内酰胺酶,2株产生碳青霉烯酶,13株产酶菌中,11株超广谱β内酰胺酶全部来自鲍曼不动杆菌,1株碳青霉烯酶来自鲍曼不动杆菌,另1株碳青霉烯酶来自溶血不动杆菌,产酶后细菌的耐药性在原有基础上又进一步加强,甚至有3株细菌出现了除黏菌素敏感外的广泛耐药。

  3 讨论

  不动杆菌是一类无动力、专性需氧、非发酵、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阴性、革兰氏染色阴性的球杆菌,临床标本中分离到的不动杆菌绝大多数是鲍曼不动杆菌,其他菌株引起的感染比较少见。据熊劲芝等报道[1],不动杆菌属细菌在临床分离出的非发酵菌中居第2位,仅次于铜绿假单胞菌。我院不动杆菌属的分离率在2009年1~9月为1.56%,在总的细菌分离率中排第4位,主要分布于呼吸道和各种分泌物标本中,不动杆菌属的分离率低于熊劲芝等报道的2.59%水平[1],也低于张静萍等报道的4.44%的水平[2]。分离的这些不动杆菌属细菌有57株分离自ICU、CCU、EICU等重症监护病区,占77%,说明在这些医院感染的高危科室要加强院内感染的控制,尤其加强对机械通气管道的消毒处理,加强对介入性导管的留置时间的控制,尽最大能力改善病房空气质量。

  不动杆菌属细菌的耐药性较强,对氨苄青霉素,一代、二代头孢菌素,氯霉素和一代喹诺酮类抗菌药物大多耐药,一般情况下,对复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦、氟喹诺酮类敏感性较好,对碳青霉烯类敏感性也较好。但是近年来,不动杆菌对这些敏感性较好的药物的耐药性有上升趋势,就本文而言,鲍曼不动杆菌不但没有对复方新诺明表现出较好的敏感性,反而对它的耐药率高达100%,属内总耐药率也高达89.9%。另外,鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类的左氧氟沙星的耐药率高达83.0%。对氨基糖甙类的庆大霉素和阿米卡星耐药率分别是93.9%和63.4%,这与鲍曼不动杆菌携带的氨基糖苷修饰酶的基因表达有关,该类基因常与含多种耐药基因的基因盒插入到整合子上一起传播。国外曾有文献报道[3],氨苄西林/舒巴坦治疗鲍曼不动杆菌疗效与亚胺培南相似。我院情况却非常不同,鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦的耐药率高达62.3%,而对亚胺培南和美罗培南保持了较低的4.1%和3.8%的耐药率,这明显低于彭敬红等报道的13.5%[4]的水平。同时,在我院对不动杆菌属的治疗中,黏菌素一直保持了较好的疗效,其耐药率为0,远低于陆春雨等的报道[5],这在很大程度上缓解了临床的治疗难度。

  近年来的研究资料显示,不动杆菌属的耐药机制包括染色体基因突变、外膜孔蛋白改变、药物主动外排系统和产生灭活酶等。Chau等报道的adeB基因表达增强可使鲍曼不动杆菌产生多药耐药[5],adeB基因是Magnet等首次在鲍曼不动杆菌中检测到的细菌主动外排泵

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