、山楂、泽泻等多味中药组成,临床已试用于治疗脂肪肝患者,取得了较好疗效。由于营养因素在脂肪肝的发生发展中占有主要地位,因此,2005年9月~2006年3月采用高脂饲料诱导大鼠脂肪肝模型,观察了ZGL对脂肪肝的治疗作用并对其部分作用机制进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物雄性Wistar大鼠,120只,体重(150±20)g,贵阳动物实验中心提供,合格证号:SCXK(黔)2002-0001。
1.2 药品及试剂ZGL由内蒙古鄂尔多斯市第二人民医院提供,批号:020816,为棕色圆形颗粒制剂,临用前将颗粒研磨成粉末,用蒸馏水配制成所需浓度使用,溶液pH=6.5。东宝肝泰片,通化东宝药业股份有限公司生产,批准文号:吉卫药准字(1996)第430110号,配制方法同上。胆固醇(化学纯,进口分装),中国医药分公司北京采购供应站经销,批号020908。血清及肝脏生化指标检测试剂盒,北京中山生物技术有限公司生产。其余化学试剂均为分析纯。
1.3 复制脂肪肝动物模型高脂饲料(玉米粉79.5%、猪油20.0%、胆固醇0.4%、胆盐0.1%), 动物自由取食,持续12周,复制大鼠脂肪肝动物模型。颈动脉放血法处死各组大鼠5只,取肝左叶同一部位组织,常规HE染色,光镜观察,脂变细胞占肝小叶的1/2~2/3或2/3以上,细胞增大或肿胀,胞浆内充满脂滴空泡,肝窦狭窄、极度狭窄甚至闭塞,表明造模成功。
1.4 分组与给药
Wistar大鼠按体重随机分为6组:正常组、模型组及ZGL低剂量、中剂量、高剂量组和东宝肝泰组。除正常对照组外,其余各组均复制脂肪肝模型。12周后终止病因刺激,开始灌胃给药,ZGL低剂量、中剂量、高剂量为1.5、3.0、4.5 g·kg-1·d-1(分别相当于临床给药量的5倍、10倍、15倍),东宝肝泰组为0.3 g·kg-1·d-1(相当于临床给药量5倍),脂肪肝模型组和正常对照组每天灌服等容量的生理盐水,连续给药12周,实验结束时,动物禁食24 h,颈动脉放血法处死动物,取血清及肝组织检测相应指标。
1.5 检测指标与方法
1.5.1 生化指标检测
取大鼠血清检测TG、总胆固醇(T-CH);大鼠肝组织检测TG、T-CH、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)。GSH检测用二硫对硝基苯甲酸法[2]。
1.5.2 病理学检测方法及指标
取肝左叶同一部位组织,常规HE染色,光镜观察,并参照文献制定肝脏脂肪半定量标准。-: 未见明显脂变; : 脂变细胞占肝小叶的1/3以下; : 脂变细胞占肝小叶的1/3~1/2; : 脂变细胞占肝小叶的1/2~2/3,细胞明显增大,胞浆内充满大小不等空泡,肝窦明显狭窄; : 脂变细胞占肝小叶的2/3以上,细胞肿胀,胞浆内充满脂滴空泡,肝窦极度狭窄甚至闭塞。
1.6 统计学处理实验数据以x±s表示,两小样本均数的比较计量资料采用t检验,计数资料采用秩和检验。
2 结果
2.1 ZGL对高脂、高胆固醇所致肝脂肪变性的影响
模型组大鼠出现明显的肝细胞脂肪变,各给药组肝脂肪变均较模型组明显减轻(P<0.01,P<0.05),其中以低剂量组减轻极为显著(P<0.01)。见表1。表1 中药复方脂肝乐对大鼠肝脂肪变性程度的影响(略)
2.2 ZGL对肝脏、血清T-CH及TG含量的影响
2.2.1 T-CH 含量
模型组大鼠肝脏、血清T-CH含量升高,与正常组比较差异有显著性(P<0.01);ZGL低剂量组降低肝脏、血清T-CH与模型组比较差异有显著性(P<0.05),见表2。
2.2.2 TG含量
模型组大鼠肝脏、血清TG含量升高明显,与正常组比较差异显著(P<0.01,P<0.05);ZGL各给药组肝脏TG含量降低,与模型组相比均有极显著性差异(P<0.01)。ZGL各给药组及东宝肝泰组血清TG含量降低,低剂量组降低血清TG含量最为明显,统计结果显示差异极为显著(P<0.01),见表2。表2 中药复方脂肝乐对脂肪肝大鼠血清、肝脏T-CH、TG水平的影响(略)
2.3 ZGL对大鼠肝脏MDA、GSH含量的影响
模型组大鼠肝脏MDA含量较正常组明显升高,脂肝乐高、中、低剂量组及东宝肝泰组MDA含量均有降低,与模型组比较差异有极显著性(P<0.01);与正常组相比,模
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