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常用抗生素在动物及人胆汁中的浓度分布和药效学研究 |
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结石和/或胆囊息肉合并肝外胆管结石或梗阻择期行胆囊切除、 胆总管切开探查患者50例， 年龄18～70岁，性别、体重不限，随机分为5组，每组10人。术前均检测谷丙转氨酶、胆红素、尿素氮、肌酐及血、尿常规。上述指标值均基本在正常范围内。试验前签署知情同意书。
1.1.2 药物：(1)哌拉西林/他唑巴坦为惠氏公司产品；(2)头孢哌酮/舒巴坦为辉瑞公司产品；(3)头孢曲松为罗氏公司产品；(4)美罗培南为日本住友制药株式会社产品；(5)左氧氟沙星为日本第一制药株式会社产品；(6)环丙沙星为拜耳公司产品；(7)莫西沙星为拜耳公司产品；(8)甲硝唑为湖北滨湖双鹤药业产品。(1)～(5)、(8)用于动物实验；(1)～(3)、(6)～(7)用于人胆汁临床研究。MIC测定的药物分别为：哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮、头孢哌酮/舒巴坦、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星, 前7种抗菌药为中国药品生物制品鉴定所标准品，后者为拜耳公司产品。
1.1.3 抗生素对照品和试剂：莫西沙星对照品由拜耳医药保健公司提供，其余抗生素对照品均购自中国药品生物制品检定所。实验试剂为：乙腈、甲醇为色谱纯；四庚基溴化铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵、三乙胺、三氯甲烷、异丙醇、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸、枸橼酸、枸橼酸钠、氢氧化钾为分析纯；10%四丁基氢氧化铵；双蒸水。
1.1.4 细菌：收集2005年6月至2006年12月我科临床分离的胆道感染最常见致病菌共157株。其中包括大肠埃希菌、肺炎克雷白菌、铜绿假单孢菌、阴沟肠杆菌、变形杆菌、鲍曼不动杆菌等革兰阴性菌96株；粪肠球菌、表皮葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、屎肠球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等革兰阳性球菌61株。
1.2 方法
1.2.1 动物实验
(1)胆汁采集方法：家兔禁食12 h后，用3%戊巴比妥麻醉，行胆总管造瘘术。留取空白胆汁标本后，按等效剂量静脉注射各待测抗生素：头孢曲松钠75 mg/kg，头孢哌酮钠75 mg/kg，哌拉西林钠300 mg/kg，美罗培南75 mg/kg，左氧氟沙星25 mg/kg和甲硝唑40 mg/kg，给药结束后分别在0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8 h等不同时间收集胆汁1.5 ml，-20 ℃低温保存待测。
(2)胆汁药物浓度测定：均采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定胆汁样本中抗生素浓度。取各胆汁标本200 μl，加入流动相或乙腈至2 ml，旋涡振荡，15 000 r/min离心10 min，取上清液经微孔滤膜过滤后进样测定药物浓度。
(3)HPLC药物浓度测定的方法学验证：①通过专属性试验及色谱行为得出分离效果良好，无内源性物质干扰。②通过回收率和精密度试验得出本法的回收率、日内日间精密度均符合要求(回收率＝100%±10%，日间精密度≤10%)［4］。
(4)抗生素胆道排泄药动学计算和统计分析：用上海宏能药动学数据处理软件计算家兔胆汁药物浓度时间数据，得出各种抗生素相应的药代动力学参数。所得数据用±s表示。
1.2.2 临床研究
(1)胆汁采集方法：患者开腹前半小时单剂静脉滴注各抗生素，剂量为哌拉西林/他唑巴坦(4.0∶0.5)4.5 g，头孢哌酮/舒巴坦(1∶1)2.0 g，头孢曲松2.0 g，环丙沙星400 mg，莫西沙星400 mg，滴注时间均为60 min。在术中收集胆总管和胆囊胆汁样本各2 ml，置-20 ℃冰箱保存待测。观察患者在整个试验期间内发生的不良事件，作安全性评价。
(2)胆汁药物浓度测定和方法学验证：同动物实验。
(3)抗生素药效学指标的测定：采用琼脂双倍稀释法测定抗菌药物对临床分离最常见的12种157株胆道病原菌的MIC。将受试菌悬液以多点接种器(DenlyA400)接种至一系列含抗菌药物的Mueller2Hinton (MH)琼脂平皿上，接上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
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