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他克莫司对移植肝脏再灌注损伤的影响 |
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te rejection was decreased in tacrolimus group （χ2=39.0, P<0.05）. Conclusions Tacrolimus may lessen reperfusion injury and cellular apoptosis in rat orthotopic liver transplantation, and it may also alleviate reperfusion injury in human liver transplantation and reduce the rate of acute rejection.
【Key words】 Liver transplantation; Reperfusion injury; Tacrolimus
移植肝脏再灌注损伤是导致肝移植术后早期肝功能异常的主要原因之一。他克莫司是一种常用的免疫抑制药物，具有抑制再灌注损伤的作用［1-2］。本研究通过大鼠肝移植模型和临床肝移植，观察他克莫司对移植肝脏再灌注损伤的影响。
1 材料与方法
1.1 大鼠肝移植
健康成年雄性同品系SD大鼠80只，体质量200～250 g，由军事医学科学院动物实验中心提供。分为实验组和对照组，每组40只。供体大鼠肝脏在离体低温条件下保存4 h。每组首先取5只供体肝脏作为低温保存4 h的对照肝脏，再各取5只未行肝移植的受体大鼠肝脏和血清作为正常对照，其余60只大鼠参照Kamada二袖套方法制成原位肝移植模型。取移植肝脏再灌注后24、48和96 h作为观察时间点，分别处死大鼠，每组每次5只，自下腔静脉取血离心制成血清待检。取小块肝组织经戊二醛和四氧化锇固定，醋酸铀-柠檬酸铅双重染色后透射电镜观察。实验组大鼠在移植术中和术后每天经尾静脉注射他克莫司， 剂量为0.3 μg/g，对照组大鼠注射相同剂量的生理盐水。
1.2 临床肝移植
选取接受原位肝移植的终末期肝硬化患者112例，根据免疫抑制方案将患者分为他克莫司组（63例）和环孢素A组（49例）。两组患者在原发疾病、年龄、术前肝功能分级、移植肝脏缺血时间、手术时间、其他药物治疗等方面差异无统计学意义（P>0.05）。
1.3 测定指标及方法
7170A全自动生化分析仪（日本HITACHI公司）测定血清ALT、AST、LDH水平，1470全自动γ计数仪（美国Pharmacia公司）测定TNF-α、IL-1和内皮素（endothelin,ET）水平，硫代巴比妥酸法测定丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。TUNEL法检测肝组织切片的细胞凋亡，RT-PCR法检测肝组织匀浆Fas和Bcl-2的mRNA水平。
1.4 统计学分析
实验数据采用x±s表示，使用SPSS 10.0软件对各组数据进行t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 大鼠移植肝脏再灌注后实验室检测
再灌注后两组TNF-α、IL-1、ALT、AST、LDH、ET、MDA均升高，但实验组低于对照组（P<0.05），见表1。表1 大鼠移植肝脏再灌注后各血清学指标的比较（略）
2.2 肝组织形态学及细胞凋亡的检测
随着移植肝脏再灌注时间延长，肝细胞内线粒体和内质网浊肿逐渐加重，线粒体内膜嵴减少，外膜变得不完整，严重者整个肝细胞呈空泡样变性，细胞核染色质浓聚，肝窦内皮细胞出现断裂，严重者脱落填塞肝窦腔。实验组肝细胞和肝窦内皮细胞超微结构的改变轻于对照组（图1，2）。
正常肝脏绝大多数细胞TUNEL染色阴性，细胞核为蓝色，再灌注后肝细胞和肝窦内皮细胞均可发生凋亡，TUNEL阳性细胞的细胞核染为棕褐色（图3，4）。在显微镜下每张切片计数10个视野的细胞，凋亡指数（AI）=凋亡细胞数/计数细胞总数×100%。结果发现，实验组再灌注后24 h的凋亡指数为（21.7±3.2）%，显著低于对照组的（29.5±8.3）%，差异有统计上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页
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