联合用药治疗实验性外伤性玻璃体出血

　　1 材料与仪器

　　1.1 动物健康新西兰大白兔40只，体质量2.25～2.5 kg，右眼为实验眼，左眼为空白对照眼。右眼随机分为生理盐水组(10眼)、蛇毒降纤酶组(10眼)、曲安奈德组(10眼)、联合用药组(10眼)。

　　1.2 试剂和仪器蛇毒降纤酶5U/瓶(广西医科大学蛇毒研究所提供)，每瓶曲安奈德40 mg/1 ml(昆明积大制药有限公司)，IL-1β、基质金属蛋白9、血小板源性生长因子、转化生长因子β1、表皮生长因子酶联免疫吸附测定试剂盒由美国Bionewtrans Pharmaciutical公司提供。Clinibio128酶标检测仪，电子显微镜(日本HZTACHZ H-600型)。

　　1.3 动物模型制作术前3 d点用洛美沙星滴眼液，复方托品酰胺散瞳，肌肉内注射氯胺酮35 mg/kg+氯丙嗪5 mg/kg，分离上方9～3点的球结膜，在角膜缘后2 mm处用巩膜穿刺刀刺向玻璃体中心部，用剪刀向两侧扩大切口，达8 mm，将脱出的玻璃体剪除，用8-0尼龙线间断缝合切口。以2 ml注射器抽取兔耳动脉血1ml，玻璃体腔注入0.3 ml全血。用1 ml注射器按实验各组要求把药物注入玻璃体：生理盐水组：注射生理盐水0.1 ml;蛇毒降纤酶组：注射蛇毒降纤酶0.1 U/0.1 ml;曲安奈德组：注射曲安奈德1.0 mg /0.1 ml;联合用药组：分别注射曲安奈德1.0 mg /0.1 ml及蛇毒降纤酶0.1 U/0.1 ml。

　　2 方法

　　2.1 玻璃体出血指数观察采用文献报道[7]分级方法。根据眼底四个象限可见程度分0～3级，各象限级别相加，总和即为指数。0级：积血完全吸收，眼底清晰;1级：玻璃体轻度积血，眼底轻度模糊，但尚能看清;2级：玻璃体中度积血，眼底很难看清，仅可见模糊结构;3级：玻璃体重度积血，眼底窥不进。手术后每两天使用直接眼底镜检查眼底情况，记录玻璃体出血指数。

　　2.2 PVR分级观察采用Fastenberg分级方法[8]。手术后每两天使用直接眼底镜检查眼底情况，记录PVR程度。

　　2.3 玻璃体液细胞因子浓度检测手术后7，14 d实验眼抽取0.1 ml玻璃体液，ELISA检测IL-1β、基质金属蛋白9、血小板源性生长因子、转化生长因子β1、表皮生长因子光度值。具体操作见试剂盒说明书。计算细胞因子浓度。

　　2.4 视网膜毒性评价手术后28 d取离视盘下方2 mm处视网膜行常规HE染色、醋酸双氧铀与枸橼酸铅双重染色后行光学和电子显微镜检查。

　　2.5 统计学分析采用SPSS10.0统计软件对数据进行处理。P<0.05表示差异有统计学意义。数据分析采用t-test、ANOVA及非参数检验Mann-Whitney Test法。

　　3 结果

　　3.1 玻璃体出血指数观察手术后3天联合用药组、蛇毒降纤酶组的眼底逐渐清晰，玻璃体尘状混浊，基本能看到视网膜情况;生理盐水组、曲安奈德组仍见玻璃体棕色混浊，眼底窥不清。结果见表1。表1 手术后3天玻璃体出血指数(略)

　　3.2 PVR分级观察手术后28天联合用药组PVR程度低于生理盐水组，两组PVR程度比较：P=0.001 3<0.01(Mann-Whitney test)。联合用药组PVR程度与蛇毒降纤酶组、曲安奈德组未见统计学意义，分别为P=0.435 9>0.05;P=0.374 2>0.05;(Mann-Whitney test)。结果见表2。表2 手术后28天PVR分级(略)

　　3.3 玻璃体腔中IL-1β检测结果见表3。表3 玻璃体液IL-1β浓度的比较(略)

　　各组间玻璃体液IL-1β含量比较 (a:P=0.008<0.05; b:P=0.018<0.05;Kruskal-wallis ANOVA)

　　手术后7天联合用药组玻璃体液IL-1β浓度比生理盐水组、蛇毒降纤酶组低(分别为t 值：6.645、P 值=0.000 0<0.01;t 值4.494、P<0.05;t-test);与曲安奈德组相比未见统计学意义(t 值：0.901、P值=0.379>0.05;t-test)。

　　手术后14天联合用药组玻璃体液IL-1β浓度比生理盐水组低(t 值：9

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