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白细胞介素1 肿瘤坏死因子 在膝关节原发性骨关节病发病中的作用 |
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es were able to produce TNF－αexce two samples.Conclusions －1β amd TNF－αmoght be involved in regulating the pathogenesis of OA.TNF－αfrom synoviocytes might not be mauor source iv synovial fluid.Human synoviocytes are able to secret IL－1β in response to physiologic amd inflammatory stimuli.Synoviocytes probably may increase the synovial fluid levels of IL－1β,which can contribute to important manifestations of osteoarthrosis.
【Key words】 Osteoarthritis Knee joint Interleukin-1 Tumor necrosis factor
近年来，在关节疾病发生、发展的研究中，细胞因子的介导作用日益受到重视。本研究通过检测关节滑液以及关节传代滑膜细胞上清液中IL－1β、TNF－α的含量，旨在探讨滑膜参与骨关节病(OA)的机理，为防治OA提供依据。
材料与方法
一、标本来源
1.原发性骨关节病组(OA组)：1997年3月～1998年2月北京协和医院骨科20例患者(根据ACR诊断标准)[1]，其中男4例，平均年龄(61.00±10.10)岁(56～68岁)，平均病程(5.25±3.59)年；女16例，平均年龄(64.13±7.69)岁(52～75岁)，平均病程(10.80±7.93)年。均排除其他骨关节疾病。
2.对照组(非OA组)：5例，其中男3例，平均年龄48岁；女2例，平均年龄52岁。1例男性标本来源于新鲜尸体(6小时内)；1例男性患者为左股骨干下段骨折行髓内钉固定术者；另1例为下肢动脉栓塞截肢者；2例女性标本来源于下肢动脉栓塞截肢者。所有病例均无关节病变。
二、实验方法
(一)滑液准备
将膝原发性骨关节病行关节表面置换时抽取的滑液，1500转/分，离心10分钟取上清液100μl分装Eppendorf管，－20℃保存待测细胞因子[2,3]。由于有4例抽不出关节滑液，故实际滑液标本为16例，其中女性12例，平均年龄(64.5±7.57)岁，平均病程(11.25±7.87)年；4例男性与5例对照组情况同上述。
(二)滑膜细胞的分离培养
OA组滑膜取自20例膝关节表面置换者，正常对照5例。分离平滑光亮的滑膜组织，RPMI1640洗液漂洗后尽量剪碎组织；0.05％I型胶原酶(Sigma产品,1mg/ml)消化组织2～3小时，100目不锈钢网过滤，1500转/分，离心5分钟，弃上清液，RPMI1640(含体积分数为10％的小牛血清，青霉素100u/ml，链霉素100u/ml)稀释细胞成悬液，接种至培养瓶中，置37℃，体积分数为5％的CO2/体积分数为95％的空气孵箱中培养，24小时后贴壁，将未贴壁细胞弃去，换新鲜完全RPMI1640液传代培养，第4～5代时待用[4]。
(三)滑膜细胞的处理
将贴壁细胞用0.25％的胰酶(无钙镁Hank液配制并用NaHCO3调节pH值为7.2)消化，转移贴壁细胞至24孔板中培养，1×105个/孔培养48小时后，加入脂多糖(LPS)20μg/ml刺激3孔，另外用磷酸盐缓冲液(PBS)刺激3孔作为平行对照。培养72小时后收集上清液100μl分装Eppendorf管，－20℃冻存待测细胞因子。
(四)细胞因子生物活性的测定
1.IL－1β含量的测定：采用双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附实验)法。在已预包被抗IL－1β单抗板石孔内加入标准品(2000pg/ml倍比稀释6个梯度)和待测上清样品各100μl，对照孔加完全培养基100μl,用封板胶封闭反应孔,置37℃60分钟后上一页 [1] [2] [3] 下一页
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