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缺血对兔股动脉平滑肌机能的影响 |
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的发生与组织缺血时间关系密切，缺血时间越长，术后发生血循环危象的机率越高。目前，关于缺血性血管痉挛的发生机理还不甚明确，且存在争议[1,2]。为了解缺血对血管平滑肌机能的影响，我们通过建立兔后肢断肢缺血模型，使用组化技术，测定血管平滑肌组织中Ca2＋－ATP酶和琥珀酸脱氢酶(sucinate dehydrogenase,SDH)活性变化，用原子吸收光谱分析技术测定平滑肌组织中Ca2＋,Mg2＋含量的变化，对缺血性血管痉挛发生的可能机理进行探讨。
材料和方法
一、动物准备
雄性新西兰大白兔18只(上海医科大学实验动物部提供)，体重2.2～3.0kg，戊巴比妥钠(30～50mg/kg)经耳缘静脉注射麻醉后，将双后肢于髋关节处离断，随机分为正常对照组，缺血4、8、16、24、48小时5组实验组，每组6条断肢，缺血各组的断肢置于4℃冰箱中保存。
二、血管平滑肌组织中Ca2＋－ATP酶、SDH活性测定
在股动脉下端取0.5cm的股动脉，OCT包埋，恒冷式冰冻切片机切片(－25℃,10μm)。用一步枸橼酸铅法对血管平滑肌的Ca2＋－ATP酶进行染色，用四氮唑蓝法对SDH进行染色，用MIAS300图像分析系统(软件由四川大学数学系提供)测定其OD值，以OD值代表酶活性强弱，进行定量分析。
三、血管平滑肌中Ca2＋、Mg2＋含量测定
手术显微镜下切取股动脉，剥除外膜，纵行剖开股动脉，滤纸擦除内皮细胞，滤纸吸干血管表面液体后称重，用1∶4的高氯酸/硝酸(均为国产优质纯)2ml进行加热消化，将消化好的血管组织用去离子水定容，然后用5000ppm氧化镧(光谱纯，英国JMC)稀释至5ml，用原子吸收光谱分光光度计(varianspectrAA－475ABD)测定血管平滑肌组织中Ca2＋和Mg2＋含量。
四、统计学处理
各组数据均以平均值±标准差()表示，组间比较用均数差别的t检验。P〈0.05为差异有显著性意义,P<0.01为差异有高度显著性意义。
结果
一、缺血对Ca2＋－ATP酶、SDH活性的影响
缺血8小时，血管平滑肌组织中Ca2＋－ATP酶、SDH的OD值与对照组的OD值比较，降低差异有显著性意义(P<0.05)，缺血16、24、48小时的血管平滑肌组织中Ca2＋－ATP酶、SDH的OD值与对照组的OD值比较，降低差异有非常显著性意义(P<0.01)(表1)，反映Ca2＋－ATP酶、SDH活性下降。
表1 缺血对血管平滑肌组织中Ca2＋－ATP酶、SDH活性的影响OD值()
缺血时间
（小时） 断肢数 Ca2＋－ATP酶 与对照组比较 SDH 与对照组比较
t值 P值 t值 P值
对照组 6 49.00±3.35 - - 84.00±5.36 - -
4 6 49.33±2.07 0.21 >0.05 82.00±4.50 0.98 >0.05
8 6 43.17±2.79 3.02 <0.05 67.67±4.08 5.50 <0.05
16 6 36.67±2.16 7.58 <0.01 62.67±3.93 8.15 <0.01
24 6 28.83±2.93 11.11 <0.01 56.67±3.83 10.44 <0.01
48 6 20.67±4.46 12.45 <0.01 50.83±3.06 13.45 <0.01
二、缺血对血管平滑肌组织中Ca2＋、Mg2＋含量的影响
血管平滑肌组织中Ca2＋含量随着缺血时间的延长，逐渐升高，缺血时间超过8小时后，血管平滑肌组织中Ca2＋含量明显增高，与对照组比较，经t检验，两者差异有非常显著性意义(P<0.01)。Mg2＋含量无明显变化0.05)(表2)。
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