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大鼠大脑损伤后皮质NMDA受体活性变化与脑水肿的关系 |
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光69号,上海虹光造纸厂)。
2.实验动物及致伤:SD雄性大鼠100只,体重(250±30)g,随机分成正常对照、假手术对照、伤后15、30分钟、1、3、6、24、72、168小时组,每组各10只。采取自由落体致伤模型造成大鼠左顶叶局限性脑挫裂伤［3］。
3.脑皮质含水量的测定:动物断头处死后,取出全脑,自损伤区后缘取脑皮质一块,仔细去除凝血块及碎裂坏死脑组织,用电子分析天平测其脑皮质湿重,然后放于110℃烤箱烘烤24小时至恒重,取出称干重,用干湿法计算其含水量。
4.NMDA受体活性测定:断头处死动物后,于冰冷条件下迅速取伤侧皮质,去除血块及碎裂组织,加入离心缓冲液,匀浆后低速离心(600×g, 4℃)5分钟,取上清再次离心(1 500×g,4℃)10分钟,取上清于37℃水浴中孵化30分钟,然后高速离心(48 000×g,4℃)15分钟,去上清,用孵育缓冲液充分混悬沉淀,以考马斯亮兰法测定膜受体蛋白浓度(浓度为1～2mg/ml)。
按照刘永学等［4］描述的方法并略作改进测定NMDA受体活性,总结合管和非特异结合管分别加膜蛋白50μg(根据标本浓度换算成体积),与终浓度分别为4,8,12,16,20,24,28,32nmol/L的［3H］-L-Glu100μl混匀,非特异性结合管内再加CPP(终浓度为100mmol/L)100μl,两组均用孵育缓冲液补足使终体积为300μl。于25℃恒温水浴中反应30分钟,冰浴终止反应,用多头细胞收集仪将膜受体蛋白收集于玻璃纤维滤纸上,80℃烤干(1小时),置闪烁液中用2 000CA/LL型液闪仪(美国PACKARD公司)测其放射比活性。
5.统计方法:按Schachard公式对所得数据进行处理,求出Bmax和KD,用F检验进行统计分析。
结 果
脑损伤后大鼠伤侧大脑皮质含水量于伤后30分钟开始上升,6小时达高峰,然后逐步下降,伤后168小时基本恢复正常(表1)。假手术组与正常组比较无显著性差异。
表1 大鼠大脑创伤后的皮质含水量变化(±s)
组别 鼠数 含水量(%)
正常对照组
10
79.46±0.53
假手术对照组 10
79.67±0.82
伤后时间(h)
0.25 10
79.66±0.82
0.5 10
80.06±0.63**
1 10
80.70±0.63**
3 10
81.31±0.78**
6 10
81.49±0.78**
24 10
81.47±0.82**
72 10
80.43±0.36**
168 10
79.49±0.67
与正常对照组比较,**P<0.01
创伤后大鼠伤侧大脑皮质NMDA受体Bmax于伤后15分钟上升,30分钟达高峰,之后下降,6小时达最低,伤后72小时基本恢复正常;KD于伤后15分钟下降,30分钟达最低,之后又上升,至伤后6小时基本恢复正常(表2)。假手术组与正常组比较无显著差异。
表2 大鼠大脑创伤后皮质神经细胞膜
NMDA受体活性变化(±s)
组别 鼠数 Bmax(fmol/mg) KD(nmol/L)
正常对照组 10
273.77±10.39
12.28±1.62
假手术对照组 10
275.6±9.16
12.03±1.59
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