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胚胎肢芽提取物对周围神经损伤后脊髓前角运动神经元的保护作用 |
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中枢相关神经元也出现变性反应,使一定数量的神经元发生损伤性死亡［1］。如坐骨神经横断常致脊髓前角运动神经元发生轴突反应,形态上表现为尼氏体溶解,核偏位等改变［2］。笔者从测定显示脊髓前角运动神经元活性的标志酶乙酰胆碱脂酶(AchE)和发生损伤性反应的标志酶酸性磷酸酶(ACP)出发,研究周围神经损伤后相关神经元内酶学的变化,并探索从大鼠胚胎肢芽中提取的活性物质(embryonic limb buds extract, ELBE)对神经元的保护作用。
材料与方法
1.ELBE的制备:剖腹取胚龄为10～15天的SD大鼠胚胎68只,将其肢芽剪下,按照笔者等［3］报道的方法制备ELBE。
2.实验动物及手术方法:选用雌性SD大鼠36只,体重(200±20)g。1%的戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔麻醉成功后,随机切除一侧坐骨神经约1cm的神经段,然后在神经的近侧端用9-0线缝合两针套接一容积约31μl的单盲端硅胶管囊,囊内注满等渗盐水,此组动物为单纯损伤组;另取上述大鼠36只,按同样的手术方法套接相同的硅胶管囊,其内注满ELBE,此组动物为ELBE保护组;再准备上述大鼠6只,不手术,只供取材作正常对照。
3.取材:手术组于术后1天,1,2,4,6周各取6只动物,麻醉后,剪开椎管,取坐骨神经进入的脊髓节段,将其腹侧朝上,沿前正中沟纵行切成两半,再切取腹侧部分,经分析天平称重后作AchE、ACP定量;正常对照组按上述同样方法处理。
4.酶学测量:将切取的脊髓组织立即投入-196℃的液氮中,加入1ml 0.1mol/L KH2PO4-K2HPO4缓冲液匀浆,然后用此缓冲液冲洗匀浆管3次,每次1ml;以5 000r/min4℃离心30分钟;取上清液用Sigma公司AchE试剂盒及上海波音特生物科技有限公司ACP试剂盒,分别测定AchE和ACP的含量,并计算出每克组织内的含量。
5.统计学方法采用t检验。
结 果
1.坐骨神经损伤后大鼠腹侧脊髓内AchE含量的变化:正常情况下AchE含量为(1.64±0.13)U/g脊髓组织。坐骨神经损伤后1天开始下降,2周降至最低,以后逐渐回升;加ELBE处理后,AchE下降缓慢,且幅度较小,1周后即开始回升,整个过程比较平稳。两者差别有非常显著性意义(表1)。
表1 AchE含量的变化(U/g脊髓组织,±s)
组别 术后时间
1天 4天 1周 2周 4周 6周
ELBE保护组 1.49±0.10
1.31±0.08
1.26±0.08
1.27±0.09
1.32±0.08
1.37±0.10
单纯损伤组 1.20±0.09
1.07±0.07
0.82±0.06
0.70±0.05
0.96±0.08
1.08±0.09
组间比较, P<0.01
2.坐骨神经损伤后大鼠腹侧脊髓内ACP含量的变化:正常情况下ACP的含量为(0.20±0.04)U/g脊髓组织。坐骨神经损伤后1天开始上升,1周升至最高,以后逐渐下降;加ELBE处理后,ACP上升缓慢,幅度变小,4天后即开始下降,整个过程波动不大。两者差别有非常显著性意义(表2)。
表2 ACP含量的变化(U/g脊髓组织, ±s)
组别 术后时间
1天 4天 1周 2周 4周 6周
ELBE保护组 0.23±0.02**
0.29±0.03*
0.27±0.02**
0.23±0.02**
0.21±0.02**
0.19±0.02*
单纯损伤组 0.29±0.03
0.33±0.03
0.37±0.02
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