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创伤小鼠反抑制T细胞的变化 |
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同伤后感染的发生密切相关［1］。因此，有关创伤与T细胞的研究正成为创伤免疫领域中的研究热点。目前有关创伤后辅助性T细胞（Th）、抑制性T细胞（Ts）的变化已有大量报道［1-3］，但创伤后反抑制T细胞（contrasuppressor T cells, Tcs）的变化情况如何尚不清楚。笔者利用小鼠截肢伤模型对此进行了探讨。
材料与方法
一、 动物模型及分组
Balb/c小鼠（本校动物所提供），雌雄各半，18～22g，6～8周龄。随机分为正常对照、伤后1，4，7，10，14天共6组，各组8只。按文献［3］的方法采用双后肢膝关节离断术制备小鼠截肢伤模型。各组动物于相应时间处死，制备脾脏、胸腺及肠系膜淋巴结细胞悬液待测。
二、 Tcs细胞数目测定
按文献［4］的方法以直接免疫荧光法进行，即在脾脏、胸腺及肠系膜淋巴细胞悬液（5×106/ml）中，加入终浓度为0.1 mg/ml的VVL－FITC（Sigma公司），冰浴 30分钟，洗涤细胞后调至原浓度，滴片，于荧光显微镜下计数200个细胞，计算阳性细胞百分率（％）。
三、 Tcs细胞、Ts细胞的分离及Tcs细胞反抑制活性测定
分别参照文献［5，6］的方法以黏附盘化法分离获取Tcs细胞、Ts细胞，以直接免疫荧光法鉴定Tcs细胞纯度>92％，以间接免疫荧光法鉴定Ts细胞纯度>95%，台盼蓝染色证明两类细胞存活率均>95%。于正常脾细胞的T淋转、IL－2诱生IL－2R表达的细胞培养系统中，同时加入Tcs和Ts细胞（均占细胞总数的10％），并设只添加Ts细胞和不添加Tcs、Ts细胞组作对照，根据Ts细胞对各指标的抑制活性及Tcs细胞对Ts细胞抑制活性的拮抗作用分别计算Ts细胞抑制率（％）和Tcs细胞反抑制率（％）。
四、 Tcs细胞形态结构观察
分离的Tcs细胞按常规处理，作光镜、透射电镜观察。
五、 数据处理
结果以平均值±标准差（±s）表示，用t检验进行统计学分析。
结 果
一、 各组Tcs细胞数目的变化
和正常对照组相比，创伤小鼠脾细胞中Tcs细胞数目于伤后4～7天明显降低；胸腺细胞中Tcs细胞数目以伤后4～10天降低最为明显；肠系膜淋巴结细胞中Tcs细胞数目的变化无统计学差异（表1）。
表1 各组Tcs细胞数目的变化（±s）
组别 鼠数 Tcs细胞数目的变化（％）
脾脏 胸腺 淋巴结
正常对照 8
8.1±1.2
9.4±1.6
8.9±1.4
伤后1天 8 9.0±1.8 9.0±2.0 9.2±2.0
伤后4天 8 6.1±1.0** 6.2±0.9** 7.8±0.9
伤后7天 8 6.9±1.3* 6.1±0.9** 8.7±1.3
伤后10天 8 7.7±1.3 6.9±1.1* 8.5±1.3
伤后14天 8 8.6±0.9 8.8±1.4 8.8±1.7
与正常对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
二、 各组Tcs细胞反抑制活性的变化
和正常对照组相比 ，创伤小鼠Tcs细胞反抑制活性于伤后1天即有降低，伤后4～10天降低更甚，伤后14天尚未完全恢复正常（表2～4）。
表2 各组不同来源Tcs细胞在T淋转检测系统中反抑制活性的变化（±s）
组别 鼠数 不同来源Tcs细胞反抑制率（％）
脾脏 胸腺 淋巴结
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