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砖火丝菌对电离辐射抗力测定方法的研究 |
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，再用平板计数法和最可能数计数法（MPN）检测其菌含量。
1.2 染菌样片的制备
1.2.1 纱布菌片
将脱脂纱布剪为5 cm×5 cm小片。灭菌后，1片纱布装于1支无菌试管中，向1片纱布上加0.1 ml菌悬液。1片含菌纱布连同试管作为一个样品。室温下置超净工作台中过夜使干燥。从菌悬液接种纱布到辐照后加液体培养基，在24 h内完成。
1.2.2 琼脂菌片
将试验菌TSB培养物转种多个PDA平板，于20～25℃培养14 d。再将平板置于培养箱中靠近风扇的位置培养并使琼脂干燥成薄片状。用打孔器从琼脂薄片上打出直径6 mm的圆片。将每个菌片放在1支灭菌试管中作为一个样品。
1.3 抗力测定
1.3.1 剂量-存活曲线测定法
取6支无菌试管，各加1.0 ml试验菌悬液。然后，1支不经照射作为对照，其余5支分别经以下剂量辐照：3、6、9、12、15 kGy。辐照后，分别进行活菌计数。据计数结果，画出剂量-存活曲线并得出回归曲线方程，从方程求出D10值。
1.3.2 部分阳性测定法
对分装于试管中的0.1 ml菌悬液、纱布菌片和琼脂菌片，用7到9个递增剂量辐照。各样品在每个剂量组的数量，装菌悬液、纱布菌片、琼脂菌片的试管分别为4支、10支与10支。辐照后，立即在每个试管中加入3.0 mlTSB。于20～25℃培养14 d，观察结果。由下式计算D10值：
D10=Dt/(lgN0-lgNt)
式中，Dt为出现阳性的最大辐照剂量；N0为每种样品初始菌数；Nt为每种样品最大剂量阳性组平均菌数，可以用ln(n/rt)计算，n为每个剂量组样品数量，rt为最大剂量阳性组的阴性试管数。
2 结果
2.1 平板培养物洗脱方法比较
对试验菌与短小芽胞杆菌的琼脂平板培养物，均用沙洗法及常规法（以玻璃珠代替细沙）洗脱，作计数比较。结果，两法的短小芽胞杆菌计数无明显区别，崐而砖火丝菌差别明显（表1）。
表1 不同洗脱方法的菌落计数结果
Table 1 Results of colony counting with different eluting methods
微生物Micro-organism 平均菌数
Average bacterial count (cfu／ml)
常规法
Conventional method 沙洗法
Sand washing method
短小芽胞杆菌
Bacillus pumilus 2 000 000 000 2 600 000 000
砖火丝菌
Pyronema domesticum 680 000 3 500 000
(3 400 000)
注: 短小芽胞杆菌为平板计数，砖火丝菌为最可能数计数（括号中为平板计数）。结果为3次试验平均值。 Note: The count of Bacillus pumilus is plate count and that of P. domesticum is the most possible count (the figure in brackets is plate count). The results are means of test for 3 times.
2.2 砖火丝菌悬液对γ射线的抗力
经60钴γ射线照射（重铬酸钾剂量计测剂量率为10～20 kGy/h），由剂量-存活曲线法测得2株砖火丝菌的存活曲线（图1，图2），从该回归曲线方程得出其D10值均略低于由部分阳性测定法测得者（表2）。
表2 2株砖火丝菌悬液的D10值
Table 2 D10values of 2 strains of P. domesticum in suspension
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