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骨形态发生蛋白和转化生长因子 |
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teoblasts in the primary callus, bone cells in fracture ends and chondrocytes expressed BMP. After the expression completed, BMP and TGF－β were distributed in the chondral matrix and granulation tissues. The bFGF was mainly distributed around non－active mesenchymal cells in the granulation tissues. Conclusions BMP, TGF－β and bFGF possessed their own different characteristics of expression and distribution and cooperatively modulated proliferation of osteogenetic cells and differentiation of chondrocytes and osteoblasts for fracture healing.
Key words：Fracture healing； Cell factors； Expression▲
骨折修复是一个复杂的骨再生过程，其组织学过程伴随着复杂的生物学调节机制。大量细胞因子在不同的骨折修复阶段发挥不同的作用，调控骨再生过程。既要保证骨原细胞(osteogenetic cell)的来源和数量，又要使骨原细胞适时地转化为软骨细胞和成骨细胞，最终完成骨折修复［1］。有关细胞因子的生物学效应的体外实验研究较多，而在原位的研究较少。笔者选择有代表性的细胞因子骨形态发生蛋白（BMP）、转化生长因子－β（TGF-β）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），观察其在骨折修复中的表达及分布情况，进而探讨其作用机制。
材料与方法
1．模型制作：实验对象为雄性成年新西兰兔，体重2.0～3.0 kg。常规手术方法，在一侧桡骨中段用线锯将骨干锯断，制作骨折愈合模型。
2．动物分组：42只兔，随机分为6组，每组7只，分别于伤后1，3 d，1，2，3，4周处死，将骨折端及周围组织一同取材。
3．主要试剂：BMP单克隆抗体（第四军医大学）；TGF-β、bFGF 单克隆抗体和SP试剂盒（Sigma 公司，美国）。
4．观察方法：取材后标本置入质量浓度为40 g/L的多聚甲醛固定24 h，以质量浓度为200 g/L的乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙1～3周，石蜡切片厚8 μm。分别进行常规HE染色和BMP、TGF-β、bFGF单克隆抗体的免疫组化染色。SP方法单克隆抗体免疫组化染色：BMP抗体工作浓度1∶300，TGF-β抗体工作浓度1∶300，bFGF抗体工作浓度1∶500。二氨基联苯胺(DAB)方法显色，阳性为棕色。对照以磷酸缓冲液(PBS)代替I抗。
结 果
1．组织学观察：伤后1 d，骨折局部充满血肿，骨端骨膜增厚，细胞增生。3 d时血肿消失，骨膜反应形成原始骨痂，在骨痂外由周围组织向骨折处长入肉芽组织，其中含有大量间质细胞、单核巨噬细胞、多核巨细胞和血管。1周时骨膜反应继续增加，骨内膜也有类似的骨膜反应。在肉芽组织中开始有软骨细胞形成。2周时骨折端骨膜反应停止，骨痂不再增加。软骨组织迅速再生，骨折间隙内也有软骨形成。3周时靠近骨端骨痂处的软骨细胞肥大，并开始出现软骨内骨化。4周时软骨大部分已骨化，形成桥接骨痂(bridge callus)。
2．免疫组化观察：伤后1 d，血肿以及血肿中炎性细胞bFGF呈阳性染色。增生骨膜间质bFGF呈阳性染色。此时，无BMP、TGF-β阳性染色。3 d时增生骨膜细胞及骨膜间质TGF-β呈阳性染色。骨端骨细胞TGF-β呈阳性染色。肉芽组织中单核巨噬细胞、多核巨细胞以及间质细胞bFGF、TGF-β呈阳性染色。肉芽组织间质bFGF、TGF-β呈阳性染色。1周时原始骨痂成骨细胞、骨端骨细胞BMP、TGF-β呈阳性染色，新形成的软骨基质BMP、TGF-β呈阳性染色。肉芽组织中单核巨噬细胞、多核巨细胞以及间质bFGF、TGF-β细胞继续呈阳性染色。肉芽组织间质BMP、TGF-&beta上一页 [1] [2] [3] 下一页
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