℃恒温震荡消化40 min，经100目筛网过滤，未过滤的组织块继续捣碎，加入0.06% Ⅳ型胶原酶震荡消化40 min，收集过滤液分装于离心管中4℃ 100 g离心10 min，取上层悬液分装于离心管4℃ 1 000 g离心30 min，去上清液，用DMEM基础培养液稀释沉淀。高速离心管分装90%、70%、50% Percoll密度梯度离心液，细胞液铺于上层，4℃ 12 000 g离心30 min，吸取70%和50%之间细胞液，DMEM基础培养液稀释，4℃ 1 000 g离心 30 min，弃上清液，用150 ml/L胎牛血清稀释细胞沉淀，至1.0×106/ml的密度。
1.2.3 透射电镜观察OVCs超微结构 取部分细胞悬液常规离心，固定，包埋，超薄切片，染色，透射电镜观察拍片。
1.2.4 ICAM-1免疫细胞化学和免疫组织化学（SABC法） 具体操作按试剂盒说明进行，光镜下观察结果。
2 结果
2.1 Percoll密度梯度离心法分离、纯化OVCs，光镜下观察 细胞为圆形或卵圆形，体积小，约为成熟肝细胞的1/3（见图1）。
2.2 透射电镜观察OVCs超微结构 细胞核大，核/浆比大，核仁小，胞浆内细胞器少，可见少量的内质网和小线粒体，整个细胞呈幼稚、未分化状态（见图2）。
2.3 ICAM-1免疫细胞化学检测 DAB显色剂显色，OVCs表面ICAM-1免疫细胞化学检测明显阳性，表明OVCs确实表达ICAM-1（见图3）。
2.4 OVCs在损伤肝组织标本中的分布 大鼠饲喂含0.06% DAB饲料后分别于第2，4，6，8，10，12周取肝组织标本，HE染色，光镜下观察，OVCs体积小，约为成熟肝细胞的1/3，呈圆形或卵圆形，胞少，嗜碱性，染色较深，核大，呈圆形或卵圆形。在肝损伤早期（2~4周），可见Hering管周围OVCs增生；肝损伤中期（6~8周），OVCs继续增生，并有肝纤维增生，OVCs沿增生的肝纤维向肝小叶迁移；肝损伤晚期时（10~12周），假小叶逐渐形成，OVCs逐渐减少（见图4）。
2.5 ICAM－1在损伤肝组织标本中表达的分布 肝组织标本行ICAM－1免疫组化检测，光镜下观察肝损伤不同时期ICAM-1的分布。在肝损伤早期（2~4周），可见Hering管周围ICAM-1阳性表达；肝损伤中期（6~8周），ICAM-1阳性表达明显，并逐渐向肝小叶弥散分布；肝损伤晚期（10~12周），假小叶逐渐形成，ICAM-1阳性表达的细胞逐渐减弱（见图5）。这表明肝损伤不同时期ICAM-1表达的分布与OVCs分布一致。
2.6 透射电镜下观察损伤肝组织标本中OVCs的分布及其与肝星状细胞的生长情况 药物损伤肝脏4周时可见OVCs在汇管区增生；6周时有肝纤维增生，增生的OVCs与肝纤维黏附生长；8周时肝脏纤维化，大量胶原纤维增生；10周时肝小叶内OVCs与肝纤维紧密黏附生长（见图6）。
3 讨论
细胞间黏附分子－1是黏附分子免疫球蛋白超家族的一种重要糖蛋白，它可介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的黏附作用。生理状态下，肝脏中的内皮细胞、上皮细胞及白细胞等多种细胞均可表达ICAM-1，但表达数量不多。本研究用致癌剂DAB饲喂Wistar大鼠致大鼠肝损伤，诱导OVCs增生，参照薛玲等[4]的方法，并加以改进，分离、纯化OVCs，并行ICAM-1免疫细胞化学检测，结果明显阳性表达，表明OVCs确实也表达ICAM-1。Petersen等[5]的研究表明肝损伤时肝组织中有少量肝细胞和肝干细胞来自骨髓造血干细胞（hemopoietic stem cells，HSCs）。Sammons等[6]对外周血的骨髓造血干细胞的归巢研究发现，HSCs表面存在一组以ICAM-1为主的粘附分子，能介导HSCs与
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