与胃肠道肿瘤相比，胆管癌对化疗药物敏感性尤差，迄今为止仍缺少成熟有效的化疗方案［1-3］。多药耐药的机制很复杂，已知的包括MDR1/Pgp、多药耐药相关蛋白（multidrug resistant associated protein，MRP）、肺耐药相关蛋白（lung resistance related protein，LRP）以及谷胱甘肽S转移酶π（glutathione S conjugate transportπ，GSTπ）均在肿瘤耐药方面扮演重要的角色。本实验通过免疫组织化学的方法检测胆管癌组织中MRP1和GSTπ的表达情况，分析其与胆管癌的临床病理特征之间的关系，探讨它们与临床上胆管癌化疗敏感性的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集本院2001年1月至2007年12月手术切除的胆管癌21例（胆管癌组，包括肝门胆管癌14例、肝外胆管癌7例）的石蜡标本，其中男8例，女13例；年龄35～77岁，平均年龄55.5岁。按照TNM分期：Ⅰ期3例、Ⅱ期11例、Ⅲ期6例、Ⅳ期1例，所有病例术前未行化疗。另取8例胆管炎症标本为良性对照组（对照组）。2组年龄、性别比等差异无统计学意义（P＜0.05）。
1.2 试剂
Trizol抽提试剂（Roche公司），RTPCR试剂盒（Promega），操作步骤按试剂盒说明进行。
1.3 方法与步骤
RTPCR检测提取液氮速冻标本细胞RNA，引物序列由上海生工生物工程服务有限公司合成。MRP1 PCR引物：A，5’AGTTCTGCGGTGCTGTTGTG3’；B，5’TTCGCTGAGTTCCTGCGTAC3’；GSTπ PCR引物：C，5’GTGCCTTCACATAGTCATCCTTGC3’；D，5’CCGTGGTCTATT TCCCAGTTCG3’。内参βactin引物序列：5’GGCATCGTGATGGACTCCG3’；5’GCT GGAAGGTGGACAGCGA3’。PCR参数设置：42℃条件下45 min行逆转录后进行PCR：MRP1引物为A、B（退火温度为58℃），GSTπ引物为C、D（退火温度为60℃）。反应条件：94℃变性3 min，94℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环。阴性对照除不加模板外，其他各种成分与待检样品相同。各样本βactin作为内对照。 RTPCR最终产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳。
1.4 结果检测及评定
RTPCR凝胶电泳后以Quality One 凝胶成像及分析系统进行观察和分析。MRP1 mRNA表达阳性者可见218 bp 条带，GSTπmRNA表达阳性者可见354 bp 条带，βactin扩增产物为613 bp，βactin阳性样本视为有效样本。靶条带/βactin>0.1为阳性表达，靶条带/βactin<0.1为阴性表达。
1.5 统计学分析
应用SPSS 11.0统计软件，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Spearman检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胆管癌组织中MRP1和GSTπmRNA表达
MRP1 mRNA阳性者可见218 bp条带，GSTπmRNA阳性者可见354 bp条带，βactin扩增产物为613 bp（图1）。MRP1、GSTπmRNA在胆管癌组织中的表达阳性率分别为76.2 %（16/21）、66.7%（14/21）；在对照组组织中的表达阳性率分别为25%（2/8）和12.5%（1/8），MRP1、GSTπmRNA在胆管癌组组织中的表达阳性率显著高于对照组（P<0.05）。见表1。表1 MRP1和GSTπ mRNA在胆管癌及对照组中的表达 （略）
2.2 MRP1和GSTπmRNA表达与临床病理分期的关系
MRP1和GSTπmRNA在胆管癌组织中的表达与性别、年龄、病理分期、分化程度和有无淋巴结转移等因素无相关性（P>0.05）。MRP1和GSTπmRNA在胆管癌组织中表达的阳性率分别为：
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