HIF 1 与CA 在肾细胞癌中的表达及临床意义

　　1 材料和方法

　　1.1 标本来源

　　收集2004年1月—2006年6月徐州医学院附属医院手术切除的肾癌石蜡包埋组织块54例，行苏木精-伊红染色确认符合诊断的标本行免疫组织化学研究。肾癌组织标本中：患者男性31例，女性23例，年龄18～73岁，平均(53±12.5)岁;其中透明细胞癌41例，乳头状细胞癌9例，其他类型4例;按1997 WHO病理分级，G1为17例，G2为23例，G3-G4为14例;按TNM分期(2002 AJCC)，Ⅰ期20例，Ⅱ期23例，Ⅲ-Ⅳ期11例。12例经病理证实的正常肾组织设为正常对照。

　　1.2 主要试剂

　　浓缩型一抗HIF-1α鼠抗人单克隆抗体、通用型P-V试剂盒及二氨基联苯胺(DAB)试剂盒为北京中杉金桥生物技术公司产品，浓缩型一抗CAⅨ兔抗人单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品。

　　1.3 实验方法

　　全部标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm 连续切片，免疫组化方法采用P-V二步法。石蜡切片脱蜡至水，3%H2O2室温孵育5 min，以消除内源性过氧化物酶的活性，蒸馏水冲洗， PBS 浸泡5 min，1 mmol/L乙二胺四乙酸(pH 8.0)抗原修复液行直接高压热修复并迅速冷却，分别滴加稀释的一抗(HIF-1α 1∶20，CAⅨ 1∶100)，4℃冰箱过夜。次日37℃复温25 min，PBS冲冼，滴加二抗辅助液，室温或37℃孵育20 min，PBS冲洗，滴加二抗，37℃孵育30 min，PBS冲洗。DAB显色剂显色，自来水充分冲洗，复染，脱水透明，封片。用PBS代替一抗作阴性对照，已知乳腺癌阳性切片作阳性对照。

　　1.4 免疫组化结果判定

　　HIF-1α阳性表达定位于细胞核，极少表达于细胞质;CAⅨ阳性表达定位于细胞质，少量表达于细胞核及细胞膜。在400倍光镜下随机观察10个视野,每个视野计数100个细胞，观察阳性细胞个数并计算其平均数。HIF-1α阳性标准:阴性(-)为肿瘤组织完全不着色或阳性细胞数≤10%;阳性(+)为肿瘤组织阳性细胞数>10%。CAⅨ阳性标准: 阴性(-)为肿瘤组织完全不着色或阳性细胞数≤10%;阳性(+)为肿瘤组织阳性细胞数>10%。

　　1.5 统计学处理

　　应用SPSS 13.0软件进行数据处理;采用Fisher 确切概率法分析HIF-1α、CAⅨ在肾癌的表达与病理分级、组织学类型及临床分期之间的统计学意义，采用Spearman 等级相关方法分析HIF-1α和CAⅨ在肾癌的表达相关性;检验水准：α= 0.05。

　　2 结 果

　　2.1 HIF-1α蛋白在肾癌组织中的表达

　　HIF-1α在54例肾癌组织中的阳性表达率为55.6%(30/54);不同病理分级间HIF-1α阳性率有差别(P=0.015)，不同临床分期间HIF-1α阳性率有差别(P=0.04)，HIF-1α阳性表达率与肿瘤组织学类型无关(P=0.894)。见表1、图1。

　　2.2 CAⅨ蛋白在肾癌组织中的表达

　　CAⅨ蛋白在54例肾癌组织中的阳性表达率为68.5%(37/54)，其表达与肾癌的临床分期、病理分级及组织学类型无关(P>0.05)。见表1、图2。 表1 肾癌组织HIF-1α及CAⅨ的表达及其与组织学类型、病理分级及临床分期的关系(略)

　　2.3 肾癌组织中HIF-1α与CAⅨ蛋白表达的关系

　　54例肾癌组织中，有26例HIF-1α蛋白与CA Ⅸ蛋白同时表达阳性，13例两者同时表达阴性。HIF-1α蛋白与CA Ⅸ蛋白在肾癌组织中表达中呈正相关关系(r=0.437,P=0.001)，见表2。表2 HIF-1α与CA Ⅸ蛋白表达的相关性(略)

　　3 讨 论

　　HIF-1α介导转录的基因如VEGF、CAⅨ、EPO、GLUT-1等[2]涉及血管新生、调节细胞内外微环境、铁与血红蛋白的代谢及能量代谢和NO的合成等，在肿瘤适应缺氧的过程中起着关键性的调控作用[3]，并在促进肿瘤的恶性转化、肿瘤的生长浸润和扩散以及对放疗及化疗抵抗中起着重要作用[4]。Zhong等[5]对包括结肠癌、乳腺癌、胃癌、肾癌等19种恶性肿瘤进行研究，其中有13种癌组织出现HIF-1α过表达，大多数正常组织不表达或仅有少量表达。本

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