descended slowly. S100B protein concentration in serum and CSF of saline group was higher than that in puncture group and blank group from 1h after model establishment (P<0.05). S100B protein concentration of saline group recovered quickly. Conclusion S100B protein concentration in serum and CSF after SAH has obvious changes. S100B protein concentration in serum and CSF after SAH is of great significance to judging pathophysiology of bloodbrain barrier.
KEY WORDS: subarachnoid hemorrhage; S100B protein; bloodbrain barrier
蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)是一种常见的出血性脑血管病[1]。该病常可导致颅内发生一系列病理生理改变，其中脑血管痉挛(cerebral vasospasm, CVS)继发的脑缺血是最常见的病理变化。另外，血脑屏障(bloodbrain barrier, BBB)的损害可引起血浆中很多有害物质进入脑组织，加重SAH后脑组织水肿，在SAH后的发病过程中亦起着重要的作用。但是，目前对BBB的研究主要是观察其结构的变化。本研究通过检测实验性兔SAH后血清和脑脊液(cerebral spinal fluid, CSF)中S100B蛋白浓度的变化，旨在探讨SAH后BBB的功能改变及其S100B蛋白在SAH后的变化规律及其意义。
1 材料与方法
1.1 材料
实验动物为雄性日本大耳白兔80只，健康状况良好，体重2.0～3.0kg，在相同的条件及环境中(饲料和温度均相同)饲养3d后进行实验。所有实验用兔均购自西安交通大学医学院实验动物中心。
实验试剂及药品：S100B蛋白ELISA试剂盒购自第四军医大学生理学教研室;40g/L多聚甲醛灌注液和250g/L乌拉坦溶液购自西安交通大学医学院器材科;利多卡因注射液及5.5号头皮针由西安交通大学医学院第一附属医院神经外科提供。
1.2 实验分组
动物随机分组，其中SAH模型组25只，盐水对照组25只，穿刺对照组25只，空白对照组5只。SAH模型组、盐水组和穿刺对照组根据建立模型后的不同时间段分为5个亚组，分别是：建模后的1h、3d、5d、7d、10d组。空白对照组取5只检测血清及CSF中S100B蛋白的正常浓度。
1.3 动物模型的建立
采用常规枕大池二次注血法制作SAH模型[2]。剪去头皮针外套管少许，自制固定穿刺深度为5～7mm的5.5号头皮针，兔枕部剃毛消毒后俯卧位，取穿刺针以与躯体成角30°于环枕间隙穿刺枕大池，穿刺深度自5mm开始，至轻负压回抽见清亮CSF流出为穿刺成功，取耳中动脉非抗凝血1.5mL/kg，0.5mL/s注入枕大池，头低位放置30min。首次注血后48h按注血量1mL/kg重复以上操作。
1.4 标本取材
所有大耳白兔饲养到预定时间后，自耳中动脉取动脉血5mL，置于离心机内3000r/min离心10min，取上清液，置于-70℃低温冰箱保存待测。头皮针穿刺枕大池取CSF 2mL，置于-70℃低温冰箱保存待测。然后用40g/L多聚甲醛灌流固定脑组织观察大体标本。用ELISA方法检测血清及CSF标本中S100B蛋白的浓度，步骤严格按照试剂盒说明进行。
1.5 统计学处理
数据以“均数±标准差”表示，用SPSS13.0软件包进行统计学处理。组间差异采用单因变量多因素方差分析、LCD检验，组内差异采用LSD法。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 SAH模型组的大体观察
SAH组动物脑组织在1h可见广泛的SAH，3、5、7d可见枕大池、基底池附近及基底动脉周围明显血凝块，随时间推移，血凝块逐渐消退，到10d时，枕大池、基底池及基底动脉周围血凝块已基本消失，仅存少量SAH
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