at in ≥2 years group (P=0.002). There was a positive correlation between the expression of p57kip2 and p21cip1 (rs=0.354, P=0.008). Conclusion The expression of p57kip2 protein and p21cip1 protein is deregulated in glioma, and its degree is correlated with the glioma differentiation and prognosis. The combined analysis of p57kip2 and p21cip1 expression is considered to be more reliable.
KEY WORDS: p57kip2 protein; p21cip1 protein; glioma; immunohistochemistry
近来研究表明，细胞周期调控异常与细胞癌变密切相关，二者的关系是肿瘤学研究的热点问题之一[1]。细胞周期调控系统由细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)和CDK抑制因子(cdk inhibitor, CKI)组成。Cyclin与CDK以Cyclin-CDK复合物的形式发挥作用，CKI能竞争性地与CDK结合，抑制其活性，从而调整细胞周期。新近发现的p57kip2为细胞周期调控因子CKIs家族的新成员，是细胞周期G1/S期的重要调控因子，与多种肿瘤的发生、发展有关[2-4]。但p57kip2蛋白的表达与脑胶质瘤的关系以及p57kip2蛋白与p21cip1蛋白在脑胶质瘤发生发展中的关系目前尚不清楚。本文应用免疫组织化学技术，探讨p57kip2、p21cip1在脑胶质瘤组织和正常脑组织中以及不同生存期的脑胶质瘤组织中的表达和意义。
1 材料与方法
1.1 材料
55例脑胶质瘤标本为西安交通大学医学院第二附属医院2002-2004年手术存档石蜡标本，术后均经病理诊断证实为脑胶质瘤，其中星形细胞瘤42例，多形性胶质母细胞瘤6例，少突胶质细胞瘤5例，室管膜瘤2例。病例中男28例，女27例，年龄4-71岁，平均40.1岁。生存时间≥2年24例，<2年31例。根据2000年修改的WHO神经系统肿瘤分类标准，对所有肿瘤进行组织学分类和分级。其中，Ⅰ级12例，Ⅱ级17例，Ⅲ级18例，Ⅳ级8例。另10例正常对照脑组织取自我院因颅脑损伤行内减压术的患者，男女各5例，年龄10-65岁，平均36.5岁。所有患者均未经过放疗或化疗。鼠抗人p57kip2单克隆抗体(NeoMarkers公司，1∶400)、鼠抗人p21cip1单克隆抗体(NeoMarkers公司，1∶100)、广谱SP试剂盒购自深圳晶美生物技术有限公司。
1.2 免疫组化染色
采用链霉素抗生物素-过氧化物酶法(SP法)检测蛋白表达。每次实验均以PBS代替一抗作为空白对照，阳性对照片由试剂公司提供。实验操作按试剂盒说明书进行。
1.3 观察测定方法
p57kip2蛋白和p21cip1蛋白均以胞核染色为棕褐色颗粒者为阳性细胞。400倍显微镜下每张载玻片计数500个细胞，依据染色阳性细胞数，计算阳性细胞所占百分比：<10%为阴性(-);10%-25%为弱阳性(+);26%-50%为阳性();>50%为强阳性()。
1.4 统计学处理
应用SPSS 11.5统计软件进行分析。用卡方检验、校正卡方检验及Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 p57kip2、p21cip1蛋白的表达
p57kip2、p21cip1在人脑胶质瘤中的阳性着色主要定位于细胞核(图1、图2)。p57kip2、p21cip1蛋白在脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达结果见表1-表2。表1 p57kip2和p21cip1在脑胶质瘤和正常脑组织中的表达(略)表2 p57kip2和p21cip1在脑胶质瘤和正常脑组织中的表达及肿瘤分级和2年生存期的关系(略)
2.2 p57kip2与p21cip1表达之间的关系
脑胶质瘤中p57kip2与p21cip1的表达存在正相关，但相关性较弱(Spearman等级相关分析
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