犬肝移植供肝的在体修整与切取方法

　　【摘要】 目的 介绍一种犬肝移植实验中供肝的在体修整与切取方法。方法 为尽可能地提高供肝质量，对供体犬肝脏和附属管道采用完全的在体游离﹑修整的方法，增加经胃十二指肠动脉灌注方式，并与快速法供肝切取相比较。结果 应用该方法，供肝灌注均匀完全，冷缺血时间可明显缩短，损伤少，显著提高了供肝质量。结论 对供肝采用完全的在体修整，增加经胃十二指肠动脉灌注是建立大动物肝移植模型良好的供肝获取方式。

　　【关键词】 肝移植;供体;冷缺血;模型

　　犬稳定的肝移植模型较难建立，一是犬的品系较杂，基因型不易确定，难以获得相匹配的供受体;二是由于犬肝脏本身的解剖特点使手术复杂，并发症多，供肝耐受冷缺血的时间较短，受体能耐受门静脉阻断的安全时限仅20-30min[1]。因此，手术中的每一个环节都要求达到最优化的处理，其中供肝的质量对于肝功能的恢复至关重要。现将我们对犬供肝在体修整与切取的经验报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物

　　杂种犬20只，购自西安交通大学医学院实验动物中心，雌雄不限，体重12-15kg，分快速取肝和在体原位修肝两组，每组各10只。

　　1.2 实验材料

　　电刀，呼吸机，常规血管外科手术器械，4℃乳酸林格液2500mL，低分子肝素12500u×1支，灌注管路两套，修肝容器、冰屑和储血袋。

　　1.3 实验方法

　　术前12h禁食，4h禁水。供体分别肌肉注射阿托品0.5mg、速眠新(0.08mL/kg)和氯氨酮(8mg/kg)麻醉。手术台上铺电热毯加热，取仰卧位，四肢固定于手术台上，气管内插管，必要时控制呼吸。术区用80g/L(8%)的硫化钠溶液脱毛，消毒铺巾，颈部右侧切口游离颈外静脉建立补液通路，游离颈内动脉插管监测血压。取腹部大十字切口，电刀止血，逐层入腹。首先观察肝脏颜色、质地及肝门情况，正常健康犬肝脏应颜色红润，有光泽，质中有弹性，肝门结构显示清晰。

　　1.3.1 快速取肝组

　　快速取肝组手术操作步骤采用快速取肝法[2]。供肝切取后置4℃乳酸林格液中仔细修整。

　　1.3.2 在体修肝组

　　在体原位修肝组操作步骤参考经典法犬供肝切取步骤[1]。在手术方式和步骤上进行了改变。具体步骤如下：以纱布保护肠管推向左侧，纱布保护肝脏下缘，充分暴露肝下下腔静脉，剪开肝肾韧带，自肾静脉水平提起并剪开下腔静脉前腹膜，游离下腔静脉两侧和背侧，分别结扎切断左﹑右侧肾上腺静脉。切断结扎肝胃韧带，游离胆总管末端切断结扎远端，于胆总管后方解剖出胃十二指肠动脉，过线牵引标记，周围组织切断结扎。自肠系膜上静脉游离门静脉至左﹑右支，结扎切断胃十二指肠静脉，保护肝总动脉，将门静脉周围脂肪淋巴组织剥向尾侧。至此肝门部完全游离，剩余门静脉﹑肝动脉和胃十二指肠动脉。此时行胃十二指肠动脉插管，备动脉灌注，向腹主动脉游离肝动脉，分别结扎切断胃左动脉和脾动脉，显露腹主动脉，游离腹腔干上、下腹主动脉，于腹腔干上、下方分别过线作为剪取腹主动脉标志。待供体肝脏游离将完成时静脉注射肝素6000u。离断肝左三角韧带﹑冠状韧带，分别缝扎左﹑右膈静脉，然后于髂血管分叉上方游离腹主动脉，行腹主动脉插管取血，备受体输血用。从肠系膜上静脉插管，管端直接插入门静脉主干，紧贴脾静脉上方结扎固定。待血压下降至80mmHg时以无损伤血管夹夹闭腹腔干后分别开始经胃十二指肠动脉和门静脉灌注4℃乳酸林格液，灌注压力分别为120cmH2O和20cmH2O。肝脏敷冰，于肾静脉上缘水平剪开肝下下腔静脉，并于膈肌上方剪断肝上下腔静脉作为灌注液流出道。牵起腹腔干上、下方腹主动脉牵引线，剪取袖状腹主动脉壁片，自脾静脉水平剪断门静脉，剪开胆囊放出胆汁，肝脏灌注满意后沿腔静脉周围环剪膈肌，将膈静脉缝扎线保留于供肝侧，移出肝脏，放于4℃乳酸林格液中，4℃乳酸林格液50mL冲洗胆道，此时仅须将肝上下腔静脉作适当修剪即可用于移植。

　　2 结 果

　　在体修肝组肝脏灌注2min以内颜色即可变为均匀的土黄色，灌注液用量为动脉(200±50)mL，门静脉(300±50)mL。供肝热缺血时间为零，手术时间(40±10)min，体外修肝时仅须将肝上下腔静脉作适当修剪，用时3-5min，门静脉开放后肝脏迅速充盈，颜色均匀，质地无明显变化，5min左右即可见有胆汁从胆总管流出，说明移植肝功能良好。而采用快速供肝切取方法，灌注液用量为腹主动脉(1000±50)mL，门静脉(1000±50)mL，修肝时间为(58±8)min，供肝质地常变脆或变软。