> 胆管癌是较常见的恶性肿瘤之一，具有诊断困难、恶性度高、转移早、预后差等特点。近年来，人们发现细胞外基质(extracellular matrix, ECM)与肿瘤生长转移关系密切。Tenascin(TN)是细胞外基质中一种具有独特六臂体结构的高分子糖蛋白[1]，在成熟组织中不表达或仅有少量表达。近来研究表明，TN在许多人类恶性肿瘤组织中有较高表达[2-3]，且其表达与肿瘤病理分级和肿瘤血管生成关系密切。 CD34 为目前公认较敏感的血管标记物，具有染色强、背景清晰易计数等优点，通过对其进行免疫组化染色，可以检测肿瘤组织微血管密度(microvascular denstity, MVD)，故MVD值可代表CD34的表达情况，从而定量的反映出肿瘤微血管增生情况。TN 和CD34 在肿瘤组织中表达的联合研究将有助于进一步了解TN的作用，为肿瘤的诊断治疗提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 收集本院1995年-2003年期间切除的胆管癌组织标本33例，其中男16例，女17例，男女人数之比为0.94∶1;年龄32-70岁(平均58.42岁)，其中≥60岁的患者占60.61% ，术前均未经任何治疗。标本均经病理证实为腺癌，组织学分级：Ⅰ级7例(21.2%)，Ⅱ级17例(51.5%)，Ⅲ级9例(27.3%)。
1.2 主要试剂 鼠抗人TN、CD34单克隆抗体(即用型)、免疫组化UltraSensitive SP超敏试剂盒(兔抗鼠，即用型)、二氨基联苯胺(DAB)显色剂，均购自福州迈新生物技术开发公司。
1.3 免疫组化染色 应用免疫组织化学SP染色技术，检测TN 及CD34 在33 例胆管癌组织标本中的表达。已知乳腺癌标本作为阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照，4例正常胆管组织标本作正常组织对照。
1.4 结果判定标准 细胞外基质有特异性棕黄色染色判定为TN阳性。TN 染色分布于细胞外基质局部，未形成明显的条索状判定为(+);TN在基质中大量表达，形成明显的条索状及网格状判定为()。CD34 染色判定参考Weidner 微血管计量方法， 即每一个染成棕黄色的，可与周围血管、肿瘤细胞和其他结缔组织区分开的内皮细胞或内皮细胞簇，不论管腔和红细胞出现与否，均作为一个单一的、可计数的微血管。先于低倍光镜(×100)下确定3 个血管着色最密集的区域，然后在高倍视野(×400)内计数微血管的数目，取3 个视野的均值，四舍五入后作为MVD。分辨不清或染色模糊的细胞不计数;管腔面积>8个红细胞直径，带有较厚的肌层的微血管亦不计数。在双盲法下进行，每张切片由两人分别判定计数，两人计数相差10%以上者重新计数。
1.5 统计学处理 采用SPSS 11.0软件包进行统计分析。TN与临床病理特征之间使用非参数秩和检验;MVD与胆管癌临床病理特征及与TN表达之间关系的分析，在两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析。以α=0.05作为检验水准。
2 结果
2.1 TN在正常胆管组织及胆管癌组织中的表达 在4例正常胆管组织中，TN 均阴性表达(图1A);在胆管癌组织中TN 阳性表达率为 81.8%(27/33)，其中(+)占36.4%(12/33)，()占45.5%(15/33)，余均为阴性(图1B-D)。
图1 TN在正常胆管组织及胆管癌组织中表达(略)
Fig.1 The expression of TN in normal bile duct and cholangiocarcinoma tissues
A: negative expression in normal bile duct tissues (SP×400)
B: positive expression of pathologic grade Ⅲ(TN expression was located in the stroma of cholangiocarcinoma. It appeared yellowish thick bands or reticula) (SP×400)
C: positive expression of pathologic grade Ⅰ(TN expression also appeared yellowish bands or reticula, but the positive rate is less) (SP×400)
D: positive expression of TN
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