. Resveratrol reduced the counts of leucocytes in BALF and the amount of MPO(P<0.05). Selectin P and selectin E are expressed more positive in pancreatitis group than in treatment group(P<0.05). Conclusion The effect of reduced severity of ALI during acute pancreatitis by resveratrol might be related to the inhibition of the selectin expression and reduction of the adhension between inflammatory cells and endothelium cells.
KEY WORDS: resveratrol; pancreatitis ; lung injury ; selectin; rats
急性胰腺炎是一种既有胰腺本身病变，又极易并发远隔脏器损害的急腹症，至今仍有较高的病死率。其中急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是急性胰腺炎早期常见的并发症和死亡原因，其死亡率高达50%[1] 。急性胰腺炎常引起急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS),虽其机制仍不十分清楚,但业已证明ARDS时白细胞在肺脏的浸润激活,通过释放细胞因子、活性氧参与了急性肺损伤的病理生理过程。本实验通过大鼠急性胰腺炎模型，探讨白藜芦醇注射液治疗急性胰腺炎大鼠后对胰腺炎肺损伤及肺组织血管内皮细胞黏附分子表达的影响，探讨其对重症急性胰腺炎肺损伤的治疗及作用机制，为白藜芦醇用于临床治疗急性胰腺炎提供试验依据。
1 材料与方法
1.1 材料 健康雄性SD大鼠96只，购自西安交通大学医学院实验动物中心，体重250-300g;牛黄胆酸钠由Sigma公司提供;白藜芦醇注射液由西安交通大学药学系提供;SABC免疫组化试剂盒、选择素P、E和单克隆抗体购自武汉博士德公司。
1.2 动物分组 将SD大鼠随机分为4组：对照组、模型组、白藜芦醇治疗组和溶剂组。每组又分为术后3、6、12h组，每组8只。
1.3 制备动物模型 大鼠术前禁食12h，不禁水。用25g/L戊巴比妥钠腹腔注射(0.1mL/100g)麻醉，正中切口入腹，上提胃十二指肠，显露胰腺，确认胆胰管，并在胆胰管十二指肠入口端以及胆总管远端分别用血管夹暂时钳夹。逆行向胆胰管注射40g/L牛黄胆酸钠，剂量为0.1mL/100g，注射完毕停留2min后松开血管夹，关腹。白藜芦醇治疗组在制模后立即经阴茎静脉注入溶解于吐温80中的白藜芦醇注射液10mg/kg，溶剂组在阴茎静脉注入与治疗组等量的吐温80，以排除溶剂对实验的影响，对照组用等量生理盐水建模。
1.4 留取标本 将各组大鼠分3批剖杀(制模后3、6、12h)，每批各8只。处死前开腹，观察胰腺、胰周等腹内病变;穿刺下腔静脉取血，开胸后观察肺脏，切取右侧肺脏做支气管肺泡灌洗，灌洗液收集后待测白细胞计数，并留取胰腺、左肺上叶标本，分别以Bouin液固定，供组织学检查及免疫组化切片。左肺下叶标本用于肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)检测。
1.5 形态学检查及肺组织评分 常规石蜡切片，HE染色，确定胰腺炎诊断，按肺水肿、出血、炎性细胞浸润、小气道损伤进行评分，每项5个等级：0、1、2、3、4。
1.6 支气管肺泡灌洗的收集及白细胞计数 开胸后观察肺脏，切取右侧肺脏，由主支气管插入直径2mm无菌塑料导管并固定，恒压注入无菌生理盐水3mL，共3次，收集灌洗液，用于白细胞计数。
1.7 肺组织MPO活性检测 取肺组织约100mg，加5g/L HTAB 2mL制备匀浆，反复冻融3次并超声粉碎(10s，3次)，4℃ 3000r/min离心30min，取上清0.1mL加反应液2.9mL，保持温度于25℃，立即在分光光度计460nm波长下进行2min的扫描，记录第30s和第90s的吸光度差值，以此1min内吸光度的变化代表酶活力的改变，MPO活力单位(U/g)= (ΔA460/min)/11.3×(g所加组织量/L反应液)。
1.8 肺脏组织选择素P、E的测定 取大鼠左上肺组织，大小约2.5cm
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