rnblotting analysis showed that the density of electrophoretic strip of Bcl2 protein was 2890.791±213.616, 3147.396±243.561 and 2594.834±204.736 in treated group. It was much higher than that in ischemic group, which was 743.376±84.123, 804.637±64.547 and 637.867±54.394, respectively. But, the relatively content of Bcl2 mRNA had no obvious difference between ischemic group and treated group. Conclusion Intraventricular administration of insulin can improve the expression of Bcl2 protein by up regulating the translation of the Bcl2, and this may be the main point to achieve the neuroprotective effect on hippocamal CA1 region post global brain ischemia.
KEY WORDS: insulin; brain ischemia; Bcl2
自1978年首次在大鼠脑组织的提取物中发现有胰岛素及其受体以来，一些研究相继发现在其他哺乳动物及人类脑中也具有胰岛素及其受体的存在。胰岛素在中枢神经系统中的作用引起了广泛的注意。在缺血性脑损伤的研究过程中，人们通过动物实验发现，全脑缺血再灌注后使用胰岛素，可减轻神经元的死亡或脱失，且这种作用在使用葡萄糖抵销其降糖作用后并不减弱，表明胰岛素在全脑缺血再灌注过程中可不依赖其外周降血糖作用而发挥神经保护作用。但胰岛素对缺血性脑损伤产生中枢保护作用的详细机理目前仍不甚明了。近年来许多文献报道,脑缺血后神经元的凋亡是缺血造成中枢神经系统损伤的一个重要原因。我们以往的研究证实，胰岛素对缺血性脑损伤具有中枢直接保护作用并可减少大鼠海马CA1区神经元的凋亡[1]。为进一步探讨胰岛素对缺血性脑损伤产生中枢直接保护作用的机理，我们对在脑缺血再灌注后，经脑室内注入胰岛素，对大鼠海马CA1区Bcl2mRNA相对含量变化及其蛋白表达的影响进行了观察。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 采用健康成年雄性SD大鼠，共72只(清洁级)，体重(300±20)g，由第四军医大学动物实验中心提供。随机分为 ①缺血组：缺血再灌注后1、3、5d分别取材，每个时间点12只。②胰岛素治疗组：取材时间点及每个时间点的动物数同缺血组。
1.2 动物模型制作 大鼠经20g/L戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射后，俯卧位固定于立体定向架上，于颈后正中第一、二颈椎处，切一长约1.5cm切口，剥离颈部肌肉显露第一颈椎上之双侧翼孔后，插入双极电凝镊，烧灼闭塞从中穿行的椎动脉，缝合伤口，置笼喂养。24h后，同法麻醉，于头顶部皮下插入针状电极，仰卧位固定。分离颈部肌肉，显露双侧颈总动脉，夹闭30s后描记脑电变化，以脑电变成直线为模型成功的标准。夹闭15min后放开动脉夹，行再灌注。于放开动脉夹后即刻，以前囟后1.2mm、中线旁开1.5mm为穿刺点。颅骨钻孔后，用微量加样器垂直进针3.5mm穿刺脑室，缺血组注入10μL生理盐水，治疗组注入1u (10μL，1×105u/L)速效基因合成人胰岛素(丹麦诺和灵公司)。
1.3 血糖测定 各组鼠分别于颈总动脉夹闭前及再灌注后30min、1、2、6、12、24h自鼠尾静脉取血约50μL，用血糖测定仪(Lifescan)测定血糖。
1.4 标本采集 于规定时间，麻醉后开胸显露心脏，自左心室插管至主动脉，剪开右心房，经预冷生理盐水冲净血液。每组每个时间点12只大鼠，其中4只以预冷之40g/L多聚甲醛灌注固定2h，断头取脑，前囟处以美兰标记，置40g/L多聚甲醛中固定4h，系列脱水，石蜡包埋，冠状切片，收取前囟后3.8mm处相邻切片两张(6μm)行免疫组化观察;4只断头取脑，剥离海马，切取双侧海马CA1区组织100mg，迅速置入液氮保存用于Westernblot检测。4只以焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的0.01mol/L PBS(4℃)50mL灌注，
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