早期高压氧治疗对颅脑损伤神经细胞凋亡的影响

　　2 结 果

　　2.1 大体观察 TBI、HBOT组绝大多数大鼠脑膜血管充血，蛛网膜下腔局部或弥漫性出血。

　　2.2 苏木精-伊红染色光镜观察 Nor组：大鼠皮质细胞边界清楚，胞核呈蓝色，细胞质及其他组织呈粉红色，部分细胞可见核仁。CA1区细胞排列密集;CA3区细胞排列较松散，但细胞层次较多、胞体较CA1区稍大。TBI组：细胞大小不均，胞核深染，细胞排列松散，间隙扩大;伤后8 h即有部分细胞胞体溶解，胞质淡染，胞核固缩，残存的细胞界限不清;随伤后时间推移，上述变化更加明显。HBOT组：伤后8 h开始，细胞形态没有明显变化;24 h时，锥体细胞略增大，少数细胞缩小，亦有核深染及胞质淡染现象，排列较密集;3天时部分细胞缩小，间隙变大，有胞核固缩现象;5天时部分细胞胞体溶解及胞核浓缩;8天时残存的细胞排列尚齐整，完整细胞数量较TBI组明显增多。

　　2.3 Bcl-2免疫组化检查 Nor组：大鼠Bcl-2在皮质及海马CA1、CA3区均有表达，在高倍镜下，表达Bcl-2蛋白的神经细胞核形态正常，很少见到凋亡或坏死的形态特征。TBI组：大鼠伤后8 h，伤侧皮质、海马CA3区Bcl-2表达强度即有下降(P<0.01);伤后1天，伤侧皮质、海马CA3区Bcl-2表达强度显著下降，灰度值水平较正常组降低(P<0.01);3天时表达强度较正常组仍低(P<0.05);5、8天时灰度值较前明显上升，但仍较正常组低(P<0.05)。HBOT组：伤后经高压氧治疗，8 h时伤侧皮质、海马CA3区Bcl-2灰度值水平较TBI组明显升高(P<0.05);1天时较TBI组高(P<0.01)，着色较深，颗粒分布较密集(图1);3天时表达最高(P<0.01);5、8天时虽略低于正常组，但仍高于TBI组(P<0.05)。见表1、2。表1 皮质Bcl-2灰度值水平 表2 海马CA3区 Bcl-2灰度值水平与Nor组比较：**P<0.01;与TBI组比较：#P<0.05，##P<0.01

　　2.4 Bax 免疫组化检查 Nor组：皮质、海马组织Bax有少量表达，可见突起着色。TBI组：伤后8 h开始，伤侧皮质、海马CA3区Bax免疫反应强度较前明显增强,3天时反应最强烈,明显高于Nor组(P<0.01);随后开始下降，至5、8天时表达强度明显下降，但仍然明显高于Nor组(P<0.05)。HBOT组：早期治疗后8 h开始，各时点Bax表达强度均较TBI组显著降低(P<0.01)，颗粒着色淡，分布稀疏(图2);除3、5天Bax灰度值较Nor组较高外，伤后8 h、1天、8天时其Bax灰度值接近Nor 组水平。见表3。表3 海马CA3区Bax灰度值水平与Nor组比较：**P<0.01;与TBI组比较：##P<0.01

　　2.5 皮质细胞凋亡率 HBOT组各时点的细胞凋亡率均较TBI明显降低(P<0.05)。3组细胞凋亡率见表4。表4 3组大鼠皮质凋亡率比较与Nor组比较：**P<0.01;与TBI组比较：#P<0.05

　　3 讨 论

　　高压氧治疗颅脑损伤临床应用已有大量报道，但在颅脑损伤早期治疗中保护脑神经细胞的机制仍不明确。有些学者已从基因、分子水平来观察和认识脑损伤机制，提出了“损伤级联反应”的概念[3] 。目前公认与细胞凋亡有关的基因是Bcl和Bax。Bcl-2通过阻断活性氧自由基的形成来防止细胞凋亡。Bcl-2蛋白的作用与一种相对分子质量为21×103的Bax蛋白有关，Bax可以抵消Bcl-2的抑制凋亡作用。因而，Bax与Bcl-2在细胞内的表达比率是决定细胞在体内受到某种刺激之后是否会发生凋亡的一个重要因素[4] 。

　　研究证明，Bcl-2、Bax 基因编码的蛋白在调节细胞凋亡过程中起着重要作用。Bc1-2过表达可封闭凋亡，促进细胞存活，而Bax增加，可促细胞凋亡[5-6]。凋亡调控基因Bcl-2被称为“长寿基因”，能够延长细胞的寿命;Bax则促进细胞死亡，它常表达于易凋亡的细胞内，且具有直接促凋亡作用。本实验中观察了高压氧作用下大脑损伤后脑皮质、海马区神经元Bc1-2和Bax蛋白表达的变化情况，结果提示高压氧治疗有效促进大脑损伤后Bc1-2的表达、抑制Bax的表达。骆纯等[7]亦报道，Bcl-2 mR

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