nd 72h,declined again at 168h.The microangium endotheliocyte was damaged at 30min,the microvilli was formed at 2h and 6h,and the cavum of micrangium was narrowed at 1272h.The ultrastructure of nervous tissue gradually worsened after brain injury.Conclusion:EGPO histochemical staining could reflect correctly the changes of cerebral microcirculation.The brain ischemia appeared early after brain injury,which subsequently interferes with microvascular structure and hypoperfusion of microcirculation.The damage of nervous cell and microangium endotheliocyte result in the brain ischemia,which subsequently interfere microvascular structure and hypoperfusion of microcirculation.
【KEY WORDS】 Brain injury;Microcirculation;EGPO
2007年12月王长卿等：急性局灶性脑挫裂伤对大鼠脑微循环及神经组织超微结构的影响第6期2007年12月河北北方学院学报(医学版)第6期 脑外伤后引起脑微循环障碍，继而导致损伤后脑缺血改变，已得到了越来越多的研究证实。我们通过Feeneys[1]自由落体撞击法建立大鼠局灶性脑挫裂伤动物模型，应用内源性过氧化物酶(Endogenous peroxidase EGPO)组织化学染色方法显示脑损伤后脑微血管形态及微血液循环状态的改变，系统分析脑损伤后脑微血管内皮细胞超微结构改变，以探讨急性局灶性脑挫裂伤后脑微循环障碍的变化规律，为临床改善损伤后脑微循环障碍、促进神经功能恢复提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 成年、健康Wister大鼠81只，雄性，体重200～250g，随机分为对照组和脑损伤组，后者按损伤后不同观察时相点又分为30min、2h、6h、12h、24h、48h、72h、168h组，每组9只。
1.2 实验方法
1.2.1 实验操作及取材 采用Feeneys自由落体撞击法致大鼠局灶性脑挫裂伤。脑损伤组用1%戊巴比妥钠按30mg/kg体重腹腔注射麻醉，右顶开颅，以750g·cm致伤力致伤;对照组开颅同损伤组，但不致伤，24h后取材。脑损伤组大鼠致伤后，按预定时相点断头处死。每组6只以损伤灶为中心冠状切开脑标本，额侧一半投入10%缓冲甲醛中固定行EGPO组织化学染色;枕侧一半行脑含水量测定。每组3只脑标本在2.5%戊二醛中固定，电镜观察微血管内皮细胞及神经细胞超微结构改变。对照组大鼠假手术后24h处死，观察指标同损伤组。
1.2.2 脑微循环改变观察 标本在10%缓冲甲醛中固定24h后，用半导体切片机切成60μm的冰冻切片，收集于玻璃皿中，用0.01M TBS液漂洗2次，每次5min。用DABNiCl过氧化物酶孵育液染色血管10min，自来水终止染色。用涂有铬矾明胶的洁净载玻片贴片，常规脱水、透明、封片。光学显微镜观察、摄片。应用CMIAS多功能图象分析系统检测微血管面密度(阳性目标总面积/统计场总面积)和单位面积平均光密度(Mean Optical Density，MOD)。电镜观察微血管内皮细胞超微结构。
1.2.3 微血管内皮细胞及神经细胞超微结构观察 动物处死后在损伤灶边缘取1mm3大小脑组织块，投入预冷的2.5%戊二醛中固定。常规丙酮梯度脱水，Epon812包埋、半薄切片、定位、修块。LKB4型超薄切片机切片，厚度40～50nm。室温下进行铅铀染色。JEM100CXⅡ型透射电镜观察、摄片。
1.2.4 脑组织含水量的测定 采用干湿法计算脑组织含水量。
1.2.5 统计学处理 数据用均数±标准差表示(x±s)。采用SPSS10.0软件进行F检验，Scheffe法进行两两比较。
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