切片置于无水乙醇乙醚(1∶1)液中浸泡，直至火棉胶脱净，再用1mol?L -1 盐酸浸泡切片，继用氯仿溶去胆红素。经上述处理后切片分别行高碘酸Schiff s(periodic acid Schiff s，PAS)染色、纤维蛋白单克隆抗体和 因子多克隆抗体SABC染色以及5mol?L -1 尿素37℃孵育30min后纤维蛋白单克隆抗体SABC染色。(4)D.二聚体和F1+2抗原采用酶联免疫吸附法测定，抗凝血酶Ⅲ抗原用免疫浊度法测定，抗凝血酶Ⅲ活性用发色底物法测定(为避免胆汁本身颜色干扰，本实验设立自身对照)。抗凝血酶Ⅲ抗原与活性试剂盒、D.二聚体试剂盒购自上海太阳公司，F1+2试剂盒、纤溶酶、抑肽酶、纤维蛋白单克隆抗体和因子多克隆抗体均购自美国ADI公司，SABC免疫组织化学试剂盒购自武汉博士德公司。
1.3 统计学处理
结果以ˉx±s表示，统计数据用SAS统计软件检验分析，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
检测结果见表1、2。从表1可知，胆石组胆汁F1+2水平明显高于非胆石组(P<0.05);胆石组总蛋白水平和D.二聚体水平也显著高于非胆石组(P<0.01);纤溶酶消化前后胆石组胆汁D.二聚体含量差值明显高于非胆石组(P<0.01)。胆石组胆汁中抗凝血酶Ⅲ抗原、抗凝血酶Ⅲ抗原与活性之比均高于非胆石组(分别为P<0.01和P<0.05)，而抗凝血酶Ⅲ活性却低于非胆石组(P<0.05，见表2)。胆石的组织化学研究结果见图1、2、3和4:胆石切片PAS染色、纤维蛋白和因子免疫组织化学染色均有阳性的网状结构分布，3种染色的网状结构分布基本一致;另一组切片经5mol?L -1 的尿素37℃孵育30min后再行纤维蛋白免疫组织化学染色，其纤维网孔的大小、网络框架结构的直径并无明显改变。3类胆石经纤溶酶消化后均可检测到D.二聚体分别为(1.062±0.210)×10 -5 、(1.332±0.219)×10 -5 及(1.541±0.236)×10 -5 mg?(100mg) -1 ，3组之间差异无显著性。
表1 胆汁中各种指标与纤维蛋白的含量(略)
Tab1 Levels of D.dimer，F1+2，total proteins and fibrin in the bile of two group patients
注:A表示消化后与消化前D.二聚体含量差值
表2 胆汁中抗凝血酶Ⅲ抗原含量与活性的比较(略)
Tab2 Levels of antigen and activity of antithrombinⅢin the bile of two group patients
图1 胆固醇结石切片PAS染色，其网状结构呈阳性 ×200(略)
Fig1 Positive network of the gallstone section after PAS staining ×200
图2 胆固醇结石切片纤维蛋白单体2(Fn2)免疫组织化学SABC染色，其网状结构呈阳性，形态分布与PAS基本一致 ×200(略)
Fig2 Positive network in the gallstone section by immuno-histochemical staining of Fn2，showing almost the same network distribution as the PAS staining ×200
图3 胆固醇结石切片 因子免疫组织化学SABC染色，网状结构也呈阳性，其形态分布与PAS、Fn2基本一致 ×200(略)
Fig3 Positive network in the gallstone section by immunohistochemical SABC staining of factor ，showing almost the same network distribution as the PAS，Fn2staining ×200
图4 胆固醇结石切片经5mol?L -1 尿素孵育30min后Fn2SABC染色，其网状结构仍呈阳性，网状结构孔径无明显改变 ×200(略)
Fig4 Positive network immunohistochemical SABC staining of Fn2in the gallstone section afte
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