Survivin基因与NET 1蛋白在膀胱癌中的表达及相互关系

　　1.2.4 PCR扩增产物电泳鉴定和半定量分析 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果，并采用凝胶图像分析系统进行扫描，以survivin带亮度(Ls)、GAPDH带亮度(Lγ)分别与背景亮度(Lb)的差值之比计算每例survivin的相对表达量,即survivin的相对表达量=(Ls-Lb)/(Lγ- Lb)。

　　1.2.5 NET-1蛋白检测 NET-1蛋白采用免疫组化法(SP法)，染色阳性呈棕黄色或棕褐色颗粒，主要定位于胞质或胞膜。

　　1.3 统计学方法 survivin相对表达量以■±s表示，采用t检验或方差分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05表明差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 膀胱癌和正常组织survivin基因和NET-1蛋白表达 survivin基因经RT-PCR扩增产物为348bp，GAPDH内参照为250bp(图1)。27例膀胱癌组织中survivin基因阳性表达17例(62.96%)，NET-1蛋白表达定位于胞质(图2)， 阳性表达21例(77.78%);10例正常膀胱组织未见survivin基因表达、而NET-1蛋白表达1例(10.00%)，两组间差异有统计学意义(P<0.01)。

　　2.2 膀胱癌中survivin基因和NET-1蛋白表达与临床病理特征的关系 见表1。

　　2.3 膀胱癌组织中survivin基因表达与NET-1蛋白表达的关系 NET-1蛋白在膀胱癌中表达21例(77.78%)，在NET-1蛋白阳性表达组中，survivin基因表达16例(76.19%)，NET-1蛋白阴性组中survivin基因表达1例(16.67%)，NET-1蛋白表达与survivin基因表达有显著相关性(χ2=7.09，P<0.01)。

　　3 讨论

　　1997年耶鲁大学的Ambrosini等用效应细胞蛋白酶受体1(EPR-1)cDNA在人类基因组文库中筛选克隆出survivin基因，定位于17q25。研究表明，survivin可表达于大多数肿瘤细胞中，但在终末分化组织中一般不表达或低表达[2]。本文膀胱癌组织和正常膀胱组织中survivin mRNA基因阳性率分别为62.96%和0.00%，说明survivin基因参与了膀胱癌的发生、发展，机制可能是survivin通过抑制细胞调亡信号使肿瘤细胞逃避机体免疫系统监视而无法清除，延长了肿瘤细胞生存期，从而有利于膀胱癌的发生、发展。如果利用survivin基因进行靶向治疗可提高膀胱癌的临床疗效。

　　NET-1是最新报道的肿瘤相关分子基因[3]，定位于1p34.1，NET-1与NET-2、NET-3、NET-4、NET-5、NET-6和NET-7总称为NET-X，属于四聚体超家族(TM4SF)的成员之一，NET-1基因可表达于人类多种细胞株中，如肝癌、胃肠道癌、宫颈癌肿瘤等组织中，可能传导细胞分裂的信号和(或)引起细胞异向分化或去分化，与肿瘤细胞增殖有关。有报道NET-1基因特异性地存在于人类前列腺组织中，由于正常、良恶性前列腺肿瘤中均可检测到NET-1基因，所以NET-1基因在前列腺组织中无诊断价值[4]， Serru等[5]用RT-PCR在人类不同的细胞株中筛选到NET-1基因表达，如宫颈癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌细胞株中。本研究通过我们制备的NET-1基因抗体采用免疫组化的方法观察了NET-1在膀胱癌中定位及表达，结果显示NET-1主要定位于膀胱肿瘤细胞胞浆内和胞膜上，其表达率为77.78%，且随着病理分级和临床分期的增高表达率有升高的趋势，说明NET-1作为一种膜蛋白和胞浆蛋白可能传导细胞分裂信号和引起细胞异向分化，从而上调膀胱癌恶性进展。由于NET-1在膀胱癌中高表达，提示有可能采用NET-1基因反义序列注入肿瘤内抵消NET-1基因的促增殖作用，达到基因治疗的目的。

　　Survivin基因和NET-1蛋白在膀胱癌细胞中高表达且两者随膀胱癌的恶性程度增加而增大，说明survivin 基因可能通过抑制膀胱癌细胞的凋亡过程及与NET-1蛋白的增殖协同作用，对膀胱癌的发生、发展起重要作用，对膀胱癌的早期诊断和临床靶向治疗具有重要作用。

　　【参考文献】

　　[1] 张辉芳，樊绮诗.抗凋亡蛋

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