【摘要】目的 探讨人参皂甙Rb1对缺血后神经元损伤的保护作用。方法 Wistar大鼠36只，随机分为假手术组、对照组和人参皂甙Rb1组，每组12只。对照组和人参皂甙Rb1组采用双侧颈总动脉暂时夹闭法制备大鼠全脑缺血模型，假手术组仅行手术而不进行缺血。人参皂甙Rb1组模型制备前3 d给药30 mg/kg，持续给药至缺血后3 d，共6 d。三组大鼠均在缺血后3 d处死。采用HE染色及光镜观察计数CA1区、CA2区、CA3区、DG区和皮层神经元死亡数量。蛋白印迹分析bcl2及bax的表达。结果 缺血组中海马CA1区、CA2区、CA3区、DG区和皮层神经元死亡率分别为：(98.2±1.1)%、(95.5±2.2)%、(54.3±11.5)%、(11.7±4.3)%、(23.1±8.6)%;人参皂甙Rb1组各脑区的死亡率分别下降至(55.2±9.7)%、(5.4±2.4)%、(4.3±3.1)%、(2.4±1.2)%、(3.7±1.9)%，与缺血组相比较死亡率显著下降(均P<0.01)。与对照组相比，缺血后的CA1、DG及皮层区神经元内bcl2表达显著减少，而bax表达显著增加。与缺血组相比较，Rb1组中CA1、DG及皮层神经元内的bcl2表达显著增加，而bax表达显著减少。结论 人参皂甙Rb1通过上调bcl2的表达及下调bax的表达来实现对缺血后神经元损伤的保护作用。
【关键词】 人参皂甙Rb1 脑缺血
人参皂甙Rb1是从人参中提取的有效成分，对外伤后神经细胞损伤具有保护作用〔1〕。本实验采用大鼠全脑缺血模型，研究人参皂甙对缺血后神经元损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 动物
雄性Wistar大鼠36只，280～320 g，吉林大学实验动物部提供。随机分为假手术组、对照组和人参皂甙Rb1组，每组12只。
1.2 试剂与仪器
人参皂甙Rb1由吉林大学白求恩医学部有机化学教研室惠赠。多克隆bcl2抗体、多克隆bax抗体购自美国Cell signaling公司，其他试剂均购自Sigma公司。光学显微镜为日本产Olympus BX51型，震动切片机为德国产Leica VT1000S型。
1.3 方法
1.3.1 模型的制备〔2〕
全脑缺血模型的制备采用双侧颈总动脉暂时夹闭法。动物禁食一夜，随意饮水。先以5%(30%O2，70%N2O)氟烷诱导麻醉，然后以2%浓度维持麻醉。尾动脉插管监测动脉血压，同时注射0.05 ml(150 IU/kg)肝素。右侧股动脉插管备用。颈部正中直切口，分离双侧颈总动脉。颞肌下和直肠内分别插入热敏探头，监测头温和体温;手术过程中用恒温毯将头温和体温保持在36.8℃～37.2℃。缺血时先用动脉瘤夹夹闭双侧颈总动脉，然后经股动脉抽血将动脉压降至50 mmHg，缺血时间为15 min。缺血结束后，除去动脉瘤夹并将血液回输。假手术组仅行手术而不进行缺血;对照组为正常缺血组;人参皂甙Rb1组模型制作前3 d给药30 mg/kg，持续给药至缺血后3 d，共6 d。三组动物均在缺血后3 d处死。
1.3.2 脑组织HE染色
将大鼠麻醉、气管插管后连接呼吸机，以3%的氟烷维持麻醉，打开胸腔，暴露心脏，左心室内注射0.1 ml(300 IU/kg)肝素后，将导管经左心室插入主动脉，先以4℃的PBS液冲洗3 min，然后用4℃含有4%多聚甲醛的PBS液灌注3 min，取出脑组织，放于含有4%多聚甲醛的PBS液中固定24 h(4℃)。用震动切片机按13 μm层厚行冠状位切片，挑选背侧丘脑处的脑片用于HE染色。HE(苏木素伊红)染色：将载有脑片的载玻片放置于背光处阴干，用梯度乙醇溶液脱水后置于苏木素溶液中15 s，冲洗干净后，放入Scott溶液中10 s，冲洗后放入伊红溶液中10 s，再经乙醇溶液脱水后进行透明处理，加盖玻片。每个切片均在40倍物镜下任意选择三个视野计算死亡细胞百分比(死亡细胞数/总细胞数)。
1.3.3 细胞浆分离〔3〕
大鼠缺血再灌注36 h后麻醉，迅速断头，分离海马CA1区、DG区及皮层脑组织，用液氮冷冻保存。将脑组织称重后，按照重量体积比1∶10加入匀浆缓冲液(1.5 mmol/L Tris baseHCl pH 7.6，1 mmol/L DTT，0.25 mol/L 蔗糖，1 mmol/L MgCl2，1.25 μg/ml pepstatin A，10 μg/ml leupeptin，2.5 μg/ml apro
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