缺氧复氧性损伤对培养海马细胞ICAM 1表达影响

　　2.2 海马细胞NOS、[Ca2+]i、SOD、MDA和GSH变化及药物的保护作用

　　在缺氧复氧组中[Ca2+]i、MDA均较正常组明显升高(P<0.01)，NOS、SOD和GSH均较正常组明显降低(P<0.01)，见表1。说明银信达莫干预可减轻[Ca2+]i、MDA升高的幅度并减轻NOS、SOD和GSH下降的幅度。表1 海马细胞缺氧复氧刺激时各项指标的变化及银信达莫干预的影响(略)

　　3 讨论

　　海马是大脑中对缺氧较为敏感的脑区，有较高的易损性，常用于脑缺血缺氧[1]及兴奋性毒性损伤的机制研究。本实验在以往用体外培养的大鼠皮层神经细胞研究的基础上，进一步用无血清培养的大鼠胎鼠海马神经元进行缺氧复氧损伤研究，无血清培养的海马神经元纯度高，且神经元生长状态好。建立缺氧复氧损伤模型以模拟临床脑I/R损伤的病理生理过程。

　　缺血缺氧时，自由基主要通过兴奋性氨基酸代谢途径、黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统和NOS途径产生。脑缺血缺氧使脑细胞线粒体破坏，不能通过有氧代谢产生ATP，黄嘌呤和O2在黄嘌呤氧化酶的作用下产生O2-，缺血再灌注时，烷自由基使脂质过氧化物自由基反应得以延续，进一步攻击不饱和脂肪酸;同时，Ca2+可提高黄嘌呤氧化酶的活性，Fe3+可促进O2-迅速转为OH·，重新激发自由基级联反应[2]。银杏叶中黄酮类成分有较强抗氧化和清除自由基作用，银杏苦内酯 B等萜类成分也能降低自由基的形成[3]，大鼠短暂性脑缺血模型应用银杏苦内酯B和银杏苦内酯A可明显减轻海马CA1区锥体细胞的迟发性损伤，对脑缺血缺氧损伤具有保护作用，但机制尚不完全清楚。本实验结果显示，海马细胞缺氧复氧时较正常培养组Ca2+和氧自由基代谢产物MDA明显增加，而其内源性清除剂SOD、GSH、NO合成的限速酶NOS均有下降;提示上述因素共同参与了海马细胞缺氧。而银杏内酯B的干预后，银杏内酯B能显著降低Ca2+，MDA含量，以及使细胞内SOD、GSH、NO合成的限速酶NOS均显著升高，说明银杏内酯B可以抑制脂质过氧化损伤，提高内源性抗氧化酶的活力，提示银杏内酯B对海马细胞的保护作用与其具有抗氧化性有关。

　　ICAM-1又称CD54，属于细胞黏附分子家族中的一类，通过与其配体结合介导白细胞与血管内皮细胞的黏附引起组织损伤[4]。因此ICAM-1在缺氧缺血性脑损伤中的作用日益受到重视。Zhang等[5]应用Northen印染法和免疫组织化学法分别监测了大鼠脑缺血再灌注区ICAM-1mRNA的表达和ICAM-1蛋白质的生成 ，发现二者在不同时段均明显增高。此外，Soriano等[6]发现ICAM-1有重要的介导脑缺血再灌注损伤作用。缺氧缺血性脑损伤时，局部血管内皮细胞以及白细胞被病变组织大量产生的炎性介质(如TNF、IL-1等)所激活，ICAM-1数量及功能明显上调，造成白细胞和内皮细胞大量牢固地黏附，这些白细胞再通过直接的机械梗阻和对神经元的细胞毒性损伤加重。本研究发现正常海马细胞也有少量ICAM-1表达，缺氧复氧时海马细胞ICAM-1表达量均较正常组明显升高(P<0.01);但是银信达莫干预后ICAM-1明显下降，较缺氧复氧组有明显减低(P<0.05)。有研究表明活性氧参与脂多糖活化NF-κB，银杏内酯B抑制NF-κB的激活与其具有的清除氧自由基、抗氧化的作用有关。而NF-κB活化后能调控一系列基因的表达：如黏附分子家族的ICAM-1、VCAM-1，前炎症性细胞因子TNF-α、IL-1β，化学趋化因子MCP-1以及一些受体分子IL-2受体，T细胞受体α、β链等[7]。这些物质都能直接或间接地导致微循环障碍，内皮及组织损伤。故银信达莫对海马细胞缺氧复氧性损伤的保护机制可能会是通过银信达莫的抗氧化的作用，抑制NF-κB对其下游基因ICAM-1的表达。

　　【参考文献】

　　[1]Danielisova V, Nemethova M, Burda J. The protective effect of amino guanidine on cerebral ischemic damage in the rat brain [J]. Physiol Res,2004,53(5):533-540.

　　[2]Grech ED, Dodd NJ, Jackson MJ, et al.

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