放线共生放线杆菌的白细胞毒素

　　3　Ltx水平的决定因素

　　A.a的不同分离株合成Ltx的能力差别颇大。如将JP2生成Ltx的水平定为100%，则Y4产生的Lx仅有10%，33384只有2%。影响Ltx水平的因素较多，可大致分为基因和环境两大类：

　　3.1　基因因素

　　3.1.1　启动子

　　JP2和652均有C，A，B，D4个基因，但启动子不同。JP2含有P1、P2两个启动子，在ltxC的上游还有一个小的开放阅读框架(ORF)。P1启动后，ORF、C、A共同转录一个4.2Kb的mRNA。ORF在体外可翻译一条10KDa的蛋白，体内作用不明。P2启动后，C、A转录一个3.8Kb的mRNA。JP2的启动子还能使C，A，B，D转录一个8Kb的mRNA，但起点不明。上述3种mRNA中3.8KbmRNA是优势mRNA。652只有一个启动子P，启动C，A转录成3.8Kb的mRNA，也可启动C，A，B，D转录成极少量的8KbmRNA。与JP2的ORF相比，652的ORF多530bp，因而652ORF不与ltx的操纵子共同转录，或者这额外的530bp使ltx启动子与C，A，B，D分离，致ltx形成无效转录。JP2由于具有两个启动子且ORF较小，所以转录效率远高于652。ltx形成两套启动子的机制还不为人所知，推测JP2可能由652丢失这530bp之后转化而来。Brogan等对JP2和652之外的15个A.a分离株的启动子分析后发现：启动子与652相似的13株Ltx水平与652相似，与JP2相仿的2株Ltx水平与JP2类似，两种水平的Ltx差别也达10-20倍。这一现象显示启动子与Ltx水平密切相关［11］。

　　3.2　转录

　　不同Ltx水平的A.a株mRNA水平有差异。Spitzn-agel按mRNA水平对A.a株排序，结果如下：JP2＞Y4＞ATCC29253＞ATCC33384，与它们生成Ltx的能力一致［3］。这种直接的联系提示Ltx可在转录水平得到调节。推测C基因产物可能参与ltx转录的调节［3］。但mRNA不能完全解释Ltx水平的变化，所以Ltx或许还受到转录后相关蛋白的调节。

　　3.2　环境因素

　　3.2.1　生长周期

　　Ltx的mRNA水平在生长周期中发生显著变化。对数生长期mRNA水平上升，进入静止期则明显下降。提示环境刺激将通过生长周期的影响而改变Ltx水平。

　　3.2.2　培养条件

　　Kolodrubetz用β一半乳糖苷酶与JP2形成嵌合子AAM17，发现Ltx的产量在厌氧条件下是有氧环境中的3-4倍，而与Fe离子浓度无关［2］。Ohta将Ltx-ATCC33384在化学恒定器培养基内培养，发现有活性的Ltx生成。301-6在厌氧，pH=7.0的果糖培养基内生长，无明显Ltx生成。在牙周袋这种独特的微环境内，pH值、氧压、营养获得性、细胞间的相互作用都构成影响A.a毒力因子表达的环境因素［9］。

　　4　Ltx对靶细胞的作用

　　A.a的Ltx是RTX家族中靶细胞特异性极高的毒素，仅作用于人PMN，巨噬细胞以及一些高等灵长类的靶细胞。Rabie报道A.a的Ltx对淋巴细胞有非致死效应［13］，Simpson认为这种效应与时间、温度相关［14］。Mangan发现A.a的Ltx对人淋巴细胞具有时间、浓度依赖的杀伤作用，Ltx＞=10ng/ml时即有细胞死亡，100ng/ml，24hr,50%的T细胞死亡［12］。

　　A.aLtx之所以能产生插膜成孔的破坏作用在于它可稳定地以两种状态存在：水溶相和插膜相。两相间的转换需要发生结构改变，有可能通过一个部分展开的球状可溶媒介物。两相转换必须跨越高能障碍，其意义在于自发状况下不发生转换，更重要的是特异性的靶细胞与Ltx结合之后展开球状媒介物的部分折叠，降低能量障碍，从而保证了靶细胞特异性。转换受到多种因

　　Mangan研究表明A.aLtx可通过类似细胞坏死和程序性细胞死亡(PCD)两种方式杀伤T细胞。发生坏死或PCD与膜损害的速度和过程有关。快而重的损害则出现坏死，轻而慢则发生PCD。10-100

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