嵌合体防龋疫苗的研究进展

　　2.3　AgⅠ/Ⅱ与CTA2B基因工程嵌合疫苗

　　1995年，Hajishengallis等[12]将编码变链菌AgⅠ/Ⅱ唾液结合区（sucrose binding region,SBR）的基因与编码霍乱毒素A2B亚单位的基因嵌合，其嵌合质粒的构建为：以含有霍乱毒素基因的质粒pRIT1080为模板，设计有XhoⅠ、Bpul1021酶切位点的引物，得到编码A2B亚单位的基因克隆，再亚克隆入含有XhoⅠ、Bpul1021酶切位点的质粒pET206，得到重组质粒pCT △A1，再以含有AgⅠ/Ⅱ sBR基因的质粒为模板，在引物设计中分别加入Ncol,xhoⅠ酶切位点，得到编码SBR的基因克隆，再插入质粒pCT△A1，得到嵌合质粒pSBR-CT△A1，转染E.coli，表达产物经ELISA检测，既有结合GM1神经节苷脂的能力，又保留了SBR的抗原性，经口免疫小鼠，诱导出高滴度的抗AgⅠ/Ⅱ的S-IgA和血清IgA，且持续3-6月。

　　3　嵌合基因疫苗

　　是指将多种编码抗原蛋白的基因通过基因重组技术，构建嵌合真核表达质粒，直接导入动物细胞，诱导保护性免疫。基因疫苗接种后，抗原在细胞内的表达与病原体自然感染过程相似，能以更天然的构象递呈[13]。目前嵌合基因疫苗在肝炎疫苗中已取得成功。如国内王炯[14]采用带有HAV、HBV主要抗原表位基因的真核表达质粒，直接接种小鼠2-3次后，产生了针对HAV、HBV的抗体应答反应。当前虽没有防龋嵌合基因疫苗报道，但变链菌作为重要致龋菌，其主要毒力因子AgⅠ/Ⅱ和GTFs的基因spap和gtfs已被成功克隆，核苷酸和氨基酸序列序列已基本清楚，对蛋白质分子中各功能区及相互作用的了解日臻完善[15]，以及对抗原表位筛选的成功，为研制防龋嵌合基因免疫提供了依据[16，17]。

　　综上，因龋病是发生于口腔的特殊疾病，只有在对共同粘膜免疫系统机理、变链菌各毒力因子、及疫苗的安全性和有效性深入了解的基础上，嵌合防龋疫苗才能最终成功。

参考文献

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　　12 Hajishengallis G,Hollingshead SK,Koga T,et al.J immunol,1995,154(9):4322-4332

　　13 Woff JA,Malone RW,Will

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