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用染色体候选区域限定策略对诏安地区人群哮喘易感性的初步研究 |
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多态性位点的检测 Fc εRI-β基因(基因组数据库编号：M89796)，PCR扩增第7外显子3′端非编码区C9869T变异区的引物序列为：外显子7-F：5′-TCACTGTGTATCAT-GCTAAGC-3′，外显子7-R:5′-TGATACAATA-CTGCATCGTGG-3′；第2内含子区(Intron)的引物序列为：内含子2-F:5′-TCTGTCTGTCGAGAAT-GTTGC-3′，内含子2-R:5′-CTGGTTAGATCTGA-GAAAGAG-3′(由赛百盛公司合成)。PCR反应采用热启动，退火温度58℃，每次PCR反应均同时进行标准DNA扩增(Cookson教授馈赠)及阴性试剂对照。PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测后，取5μ1 PCR产物，加入5U Rsa Ⅰ，37℃消化2小时，2％琼脂糖凝胶电泳分析结果。根据等位片段能否被RsaⅠ酶消化，确定其基因型，即将两个等位片段均不能被切开(RsaI位点缺失)定为AA型，均被消化(有RsaⅠ位点)定为BB型，杂合状态则定为AB型。
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