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9 1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制 |
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欧阳为明 金伯泉 李琦 李林 刘雪松 韩卫宁 李德敏 夏海滨
摘 要 目的：探讨9.1C3分子对杀伤细胞功能的影响。方法：以新鲜分离的PBMC或混合淋巴 细胞培养活化的淋巴细胞为效应细胞，采用重导向杀伤实验(Redirected killing assay, R KA)观察9.1C3抗体对效应细胞杀伤P815细胞作用及其杀伤过程中TNF-ɑ分泌的影响。结果 ：9.1C3抗体能显著抑制杀伤细胞对靶细胞的细胞毒作用，并使效应细胞分泌TNF -ɑ水平降低。结论：9.1C3分子是一种抑制型杀伤细胞受体。
关键词 细胞毒细胞 TNF-ɑ 抑制型杀伤细胞受体
中国图书分类号 R392.12
The inhibitory effect of 9.1C3 molecule on cy totoxicity of human killer cells
OU-YANG Wei-Ming JIN Bo-Quan LI Qi
（Departmen t of Immunology, Fourth Military Medical University, Xi'an 710032）
Abstract Objective：To investigate the effect of 9 .1C3 antibody on human killer cells.Methods：Redirected killing assay was employed to stu dy the effect of 9.1C3 antibody on cytotoxic activity of killer cells, in which freshly isolated PBMC or mixture lymphocyte culture cells were used as effectors,and P815 was used as target cells. Results：Cytotoxicity of effectors induced by CD16 was significantl y inhibited by 9.1C3 antibody and the secrection of TNF-ɑ was also inhibited du ring the killing phase.Conclusion：9.1C3 molecule is a kin d of killing cell inhibitory receptor.
Key words Killer cell TNF-ɑ Killing cell inhibitiory receptor
1990年以来，有关NK细胞受体的研究有了突破，克隆和鉴定了一批NK细胞 刺激型或抑制型 受体，并对不同类型受体介导的信号转导有了全新的认识。从分子水平进一步阐明了NK细胞 参与机体先天免疫(Innate immunity)以及调节免疫应答。重导向杀伤实验(Rediercted kil ling assay,RKA)是一种确定杀伤细胞受体性质的方法［1］，RKA是以表达Fc受体的P 8 15为靶细胞，在杀伤系统中加入杀伤细胞膜分子相应的抗体，观察其对效应细胞杀伤靶细胞 的促进或抑制作用，从而确定抗体识别的受体为刺激型或抑制型杀伤细胞受体。应用RKA已 确定CD158a、CD158b、p70、p140、p49、LAIR-1等为抑制型受体，CD2、CD16、CD44、CD69 、NKR-P1等为刺激型受体。9.1C3是通过从外周血分离的人NK细胞免疫小鼠筛选到的1株 单抗［2］，它能显著抑制新鲜分离NK细胞对K562细胞的细胞毒作用，其作用的机制 还不清楚。本文应用RKA方法研究9.1C3分子对杀伤细胞功能的影响，同时观察RKA中9.1 C3抗体对杀伤细胞分泌TNF-ɑ的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂 Na251CrO4购自Amershan公司，TNF-ɑ EL ISA试剂盒为本室制备。
1.1.2 抗体和细胞系 9.1C3、CD16和CD57单克隆抗体为本室制备。K56 2、P815的Daudi细胞为本室冻存，上述细胞培养于含10%FCS的RPMI1640培养基中。
1.2 方法
1.2.1 效应细胞的制备 取健康人外周血，用Ficoll分离单个核细胞， 分离得到的PBMC直接用[1] [2] 下一页
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