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人类疱疹病毒6 7型体外感染淋巴细胞对CD抗原表达的影响 |
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姚堃彭光勇 任强 季晓辉 周峰
中国图书分类号 R373 R392.11
人类疱疹病毒6 、7型（HHV-6、HHV-7）是近年发现的人类疱疹病毒家族 的 新成员，它们对淋巴细胞具有高度的亲嗜性，同属于人类β-疱疹病毒。HHV-6根据体 外生长特点，对单抗的反应性及限制性酶切图谱等方面特征又分为2种类型：A型和B型［1］。本文 研究了HHV-6A型株GS及我室分离的HHV-6 B型株 CN5、HHV-7YY5 3株病毒感染淋巴细胞 对CD抗原表达的影响［2，3］，并对其免疫机理作了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 病毒株 HHV-6 GS标准株:香港大学微生物系Prof.M.H.Ng惠赠, 在 HSB2细胞株上传代培养。HHV-6 CN5株：我室从ES患儿外周血单个核细胞中分离的中国南京 株，在人脐血单个核细胞上传代培养。HHV-7 YY5株:我室从一肾病患儿唾液中分离的HHV- 7中国南京株,在SUPT1细胞上传代培养。
1.2 细胞 SUPT1、HSB2细胞系:来自香港大学微生物系 , 用含10%新 生牛血清的RPMI1640传代培养。人脐血单个核细胞(CBMCs):南京妇幼保健院提供肝素抗凝 脐血,Ficoll分离,在淋巴细胞生长液中培养。培养条件：20%新生牛血清的RPMI1640,含PH A 40 μg/ml,IL-2 10 U/ml,谷氨酰胺2 mmol/L,青、链霉素各100 U/ml。
1.3 试剂 CD2、CD3、CD4、CD8、CD45RA单克隆抗体, 碱性磷酸 酶桥联酶标试剂盒(APAAP Kit)：北京邦定公司产品。
1.4 APAAP法检测CD抗原 将PHA 预刺激的 CBMCs 调浓度为1×106 细胞/ml,分别接种100 TCID50/ml GS、CN5、YY5病毒,感染48 h后离心涂片, 用 同一批未感染 的CBMCs同样处理作对照,按APAAP试剂盒说明书步骤操作。待检CD抗原有CD2、CD3、CD4、CD 8、CD45RA ,表面有红色标记物的细胞为阳性细胞,数200个细胞,计算阳性细胞百分率。
1．5 统计学分析 采用sigmastat统计软件,配对资料用配对t检验 ，两样本均数比较用t检验，P<0.05 有统计学意义。
2 结果
HHV-6 GS、CN5株、HHV-7 YY5株感染CBMCs 48 h后对CD抗原表达的影响，见表1。
从表1可见，和对照组相比，HHV-6GS、CN5株感染对CD2无影响，而两者都使CD4表达明 显升高，CD3表达明显降低，其中GS株使CD3降低比CN5株更为明显；但GS株感染使CD8 、CD45RA表达显著降低，而CN5对CD8 、CD45RA无明显影响。HHV-7YY5株感染使CD2表达明显升高 ，CD4、CD45RA表达显著降低，对CD3、CD8无明显影响。
表1 GS、CN5、YY5体外感染CBMCs 48 h对CD抗原表达的影响
Tab.1 Effects of CD-Ag expression on CBMCs at 48h post infection
with GS,CN5 and YY5 strains
CD-Ag Percentages of CD-Ag positive cells(%,)
GS strain CN5 strain YY5 strain
Infected Control Infected Control Infected Control
CD2 58.2±7.73) 61.2±5.1 65.8±5.6 3) 62.8±4.4 72.6±5.01) 61.2±5.1
CD3 39.0±7.01)3) 73.4±3.8 53.0±9.51)2 )3) 68.6±3.2 73.6±3.4 73.4±3.8
CD4 52.4±3.21)3) 46.3±2.3 50.5±8.91)3) 43.1±6.5 32.3±2.01[1] [2] 下一页
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