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全脑缺血再灌注大鼠小脑NGF BDNF的表达 |
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NF的神经生化改变。
1 材料与方法
1.1 动物分组及动物模型制备 选用Wistar老龄大鼠，月龄10～12个月，体重420～520 g，雌雄随机分组。假手术 组4只；实验组分脑缺血15 min组、脑缺血15 min再灌注1 h、6 h、2 d、4 d、9 d组，每 组5只。采用Pulsinelli-Brierley4血管阻塞法进行改良［2］，用10%水合氯醛给大鼠进行腹腔麻醉(0.3 ml/100 g体重)，分离双侧颈总动脉，用两根缝合线分别绕过每侧颈总动 脉系一个松套(待24 h后拉套断流用)，电凝双侧椎动脉。24 h后，在大鼠清醒状态下 拉双侧颈总动脉套，阻断双侧颈总动脉血流15 min，此为全脑缺血期，去除颈 总动脉套为再灌注期。假手术组不做颈总动脉断流和椎动脉电凝，其余过程与实 验组相同。
1.2 脑组织制备 各组大鼠在完成实验过程后给予10%水合氯醛过量腹腔麻 醉，然后用4%多聚甲醛 固定脑组织，取脑分离出小脑，将脑组织浸于相同固定液48 h，石蜡包埋。免疫组 化染色采用ABC法，试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。
1.3 表达结果判定方法 根据阳性细胞在相应视野内占的比例情况，将表达结果分成5种。(1)几乎无表 达：几乎无阳性细胞；(2)少量表达：阳性细胞占1/4；(3)中量表达：阳性细胞占 1/2；(4)大量表达：阳性细胞占3/4；(5)超大量表达：几乎均为阳性细胞。
2 结果
2.1 NGF表达 假手术组结果显示除梨状细胞层有少量NGF表达外，分子层、颗粒层和髓质均无 NGF表达。从缺血15min至再灌注2d期间，分子层、颗粒层和髓质均未出现NGF表达 ；到再灌4d时三者分别出现少量、中量和大量NGF表达；于再灌9d时，髓质NGF表达 变为少量，分子层和颗粒层NGF表达则消失。梨状细胞层于再灌注2d时NGF表达一过性 增加，此后降至基础水平，详见表1。
2.2 BDNF表达 假手术组结果显示分子层和梨状细胞层均无BDNF表达，颗粒层有少量BDNF表达， 而髓质有大量BDNF表达。从缺血15min至再灌9d期间，分子层和梨状细胞层始终无 BDNF表达；颗粒层BDNF的表达一直稳定保持原基础水平。髓质于缺血15min起BDNF 表达迅速增至超大量，再灌2d后降至原基础水平。具体表达结果见表1。
表1 老龄大鼠全脑缺血再灌注小脑NGF、BDNF表达结果
Tab.1 Expressions of NGF and BDNF in cerebellum areas
after whole brain ische mia/reperfusion in senile Wistar rats
Groups (Molecular layer)/(NGF BDNF) (Prukinje layer)/(NGF BDNF) (Granular layer)/(NGF BNDF) (Medulla)/(NGF BDNF)
Gontrol group[ ]- - + - - + - +
- +++
Ischmia 15min - - + - - + - ++++
Reperfusion 1h - - + - - + - ++++
Reperfusion 6h - - + - - + - ++++
Reperfusion 2d - - ++ - - + - +++
Reperfusion 4d + - + - ++ + +++ +++
Reperfusion 9d - - + - - + + +++
Note:No expression,(+)A 1:ttle expression,(++) Middle quantity expression ,(+++) A great quantity expression,(++++) Super quantity expression
3 讨论
正常老龄大鼠的小脑仅梨状细胞层有少量NGF表达，而分子层、颗粒层和髓质均无 NGF表达，这说明小脑不是富含NGF的脑组织。国内尚未见NTFS实验研究的报道，国外 关于NGF在小脑具体、详尽分布情况的研究尚少报道，仅见笼统报道小脑含有NGF。 在缺血15 min至再灌注2 d期间，分子层、颗粒层和髓质均未出现NGF表达，这说明上 述结构对急性应激刺激反应迟钝，或者提示参与神上一页 [1] [2] [3] 下一页
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