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广西地区葡萄糖 |
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nosis, prevention and cure of G6PD deficiency. The results may be of significance in anthropology and genetics as well.
【Key words】 Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency Gene mutations Polymerase chain reaction
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)参与的磷酸戊糖旁路是红细胞产生还原型辅酶Ⅱ(reduced nicotinamide adenine dinucleotide, NADPH)的唯一途径。G6PD缺陷使NADPH生成障碍，削弱了机体的抗氧化体系即还原型谷胱苷肽(reduced glutathione, GSH)和过氧化氢酶(catalase, CAT)清除氧化性物质的能力，红细胞在内外源氧化性物质的攻击下破坏溶血。G6PD基因突变是G6PD酶缺陷的本质，截至1996年6月全世界已报告了78种基因突变型，其中在中国人中发现12种，包括cDNA95(A→G)、cDNA392(G→T)、cDNA487(G→A)、cDNA493(A→G)、cDNA592(C→T)、cDNA835(A→T)、cDNA871(G→A)、cDNA1024(C→T)、cDNA1311(C→T)、cDNA1360(C→T)、cDNA1376(G→T)、cDNA1388(G→A)。广西是我国G6PD缺陷症的高发省区，G6PD基因突变类型的揭示，对于研究该病的发病机理和临床表现、遗传与优生、民族起源与迁徙具有重要意义。
1 材料和方法
1.1 研究对象 56例男性患者是本院门诊或住院的广西籍患者，无亲缘关系。所有病例均经G6PD四氮唑蓝定量法测定及家系分析，诊断为G6PD缺陷。
1.2 基因组DNA制备 按文献［2］提取基因组DNA。
1.3 G6PD基因突变检测
1.3.1 PCR结合等位基因寡核苷酸(allele specific oligonudeotide, ASO)探针点杂交(PCR/ASO点杂交)检测G6PD基因突变。引物设计：各引物位置、扩增片段长度及常见G6PD基因突变如图1所示。引物G3、G4、G6、G7、G11、G12的碱基序列见表1。
图1 12种G6PD基因突变位点及PCR引物位置
Fig 1 Locus of 12 G6PD mutations and PCR primers
表1 引物G3、4、6、7、11、12核苷酸序列
Tab 1 Nucleotide sequence of primers G3、4、6、7、11、12
Primer
(引物) Locus
(扩增部位) Sequence(5′-3′)
(序列) PCR product
(扩增长度bp)
G3 6，7，8 5′-TGTCCTCTGGCTGGTTTTGAAT-3′ 1593
G4 exon 5′-CCCTGGTCCATCTCGAGTCTAT-3′
G6 10～12 5′-AGCCGGGCATGTTCTTCAAC-3′ 639
G7 13,exon 5′-CCAGGGCTCAGAGCTTGTG-3′
G11 5，6 5′-TATGTGGCTGGCCAGTACGATG-3′ 902
G12 exon 5&pri
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