|
中国人胃癌组织微卫星DNA的不稳定性研究 |
| |
们发现了在人类基因组中存在一类不编码的数目可变的重复DNA序列。它们的种类多、分布广、呈高度多态，其中2～6个核苷酸为重复单位的短序列重复(short sequence repeats, SSRS)被称为微卫星DNA (microsatellite DNA,MS)， 其长度一般小于60bp。现已推出成套的MS引物，几乎遍布每一条染色体上。它们已被用于遗传病的基因组DNA的连锁分析，也为散发性肿瘤的研究提供了标记。我们选择了29个多态微卫星标记，采用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术对42例胃癌组织进行了微卫星不稳定
1 材料和方法
1.1 实验材料 4例高分化胃癌，胃癌石蜡包埋标本来自于本所病理室，男3例，女1例，年龄在43～61岁之间；胃癌新鲜手术标本共38例，其中18例来源于本校肿瘤所，20例来自内蒙古医学院，女13例，男25例，年龄分布在31～75岁之间；以上标本包括其相应的正常癌旁组织(病理证明无癌细胞)。
1.2 DNA样品的抽提 新鲜组织块DNA的提取：取组织块1cm×0.25cm×0.2cm用组织匀浆机打碎组织块；石蜡包埋组织中提取DNA用洁净刀片将石蜡块切成小碎片，置于1.5ml Eppendorf管中，加入适量二甲苯脱蜡3次，乙醇洗涤，真空干燥后剪碎组织块。然后，分别加入1ml Hert buffer和蛋白酶K，于37℃过夜，酚-氯仿-异戊醇抽提，紫外分光光度计定量后备用。
1.3 PCR反应 30个MS引物购自美国Research Genetics Inc，200μl PCR反应体系中加入基因组DNA 10～100ng，上、下游引物各10pmol，10×PCR buffer 1μl 50～200μmol／L 4×dNTP， 0.5U Taq DNA聚合酶。经94℃ 30秒，50～60℃30秒，72℃ 30秒，35个循环，72℃5分钟。
1.4 结果判定5μl PCR产物94℃变性5分钟，上样于8%聚丙烯酰胺凝胶1×TBE，25℃或4℃，恒功率45W，待二甲苯青接近下缘时，关闭电源，取下凝胶。银染后观察结果。将肿瘤组织标本与其相应正常组织PCR产物同时上样比较，若肿瘤组织的条带与正常相比出现等位基因条带的增多时记为MSI。实验结果采用χ2检验。
2 结果
在实验中选择了42例胃癌标本(肿瘤组织和相应的正常组织，其中低分化胃癌34例、印戒细胞癌4例、高分化胃癌4例)分别在除Y外的每一条染色体上，对29个位点进行了MSI分析，结果见附表、附图。胃癌平均MSI频率为33.9%。MSI频率较高的位点是D3S1067(51.35%)、D9S257(47.65%)、D3S1577(51.35%)、D8S279(41.15%)、D1S243(34.21%)、D7S520(30.23%)、D2S147(37.84%)等。低分化胃癌在D12S77、D16S403、D18S58、D18S69、D20S199没发现MSI；印戒细胞癌在D2S136、D10S197、D13S175、D15S205、D16S403、D17S945、D18S58、D18S69、D20S199、D21S267、D22S284及DxS1226亦没发现MSI；所有胃癌标本在D16S403、D18S58、D18S69、D20S199位点均未发现MSI，说明胃癌在以上诸位点的突变率极低。我们发现4例高分化胃癌在受检的7个位点上均为正常。在低分化和印戒细胞癌中，同一个标本至少有一个位点，表现MSI，最高达9个位点。低分化胃癌和印戒细胞癌与高分化胃癌比较，MSI频率明显高于后者(均P＜0.01)；低分化胃癌和印戒细胞癌之间无明显差异(P＞0.05)。
附表 不同类型的胃癌在染色体各位点上的MSI频率(%)
Tab Frequency of microsatellite instability in different
histopathological types of gastric carcinomas(%)
Locus
(位点) Map
(定位) Well different
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 用简并寡核苷酸引物构建人类染色体区带特异性探针池的技术
下一个医学论文： 广西地区葡萄糖
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文